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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 有关用酶标仪测蛋白质表面疏水性的问题
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钢琴兔

银虫 (小有名气)

[求助] 有关用酶标仪测蛋白质表面疏水性的问题已有3人参与

没有荧光分光光度计，但是想用ANS荧光探针法测定蛋白质的表面疏水性。之前用了酶标仪做的，数据出来后以荧光强度对蛋白质浓度作线性回归，要求R2》=0.99，可是我的数据一点也不好：
蛋白质浓度mg/ml   荧光强度
0.1697                   1224.8
0.5091                   1252.15
0.8485                   1209.05
1.1879                   1220.15
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1楼2014-04-16 09:29:27
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钢琴兔

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 答非所问 at 2014-05-01 16:18:56
你用的激发波长是多少？

我用了340nm  也有文献说用390nm
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3楼2014-05-03 08:52:40
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钢琴兔

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyb346 at 2014-05-12 10:25:05
我想问一下，你用的ANS是磺酸形式，还是它的镁盐或者钠盐？他们之间有什么区别？

ANS磺酸形式，这个在pH7 下不好溶，虽然文献上都报道说用pH 7的缓冲溶液配制，但是我试过了，没法完全溶解啊，后来加了一点氢氧化钠溶液才溶解的，我猜就是生成了ANS钠盐，这个比较好溶解。我听说直接买ANS钠盐就行，因为ANS真心不好溶
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6楼2014-05-30 09:07:51
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钢琴兔

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sunrisejj at 2014-05-29 16:09:58
你的数据太少了，你blank值是多少？仪器的Gain值是如何设置的？有无副孔？另外我个人认为仅取四个点做标曲可能不够，应该适当增加。

后来又做了很多，一个浓度做了5个孔，空白就是缓冲溶液，数据还是很差劲，有些缓冲溶液的吸光值都比样品大了，哭···
什么叫仪器的Gain值，副孔啊，求教~~~~
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7楼2014-05-30 09:09:57
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钢琴兔

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gyb346 at 2014-06-02 22:05:58
数据不好只能重做。而且注意是荧光增量，就是要扣除蛋白本底。

恩恩 谢谢！下回做了希望还可以和你讨论~
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11楼2014-06-08 18:33:26
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钢琴兔

银虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by 861565768 at 2014-06-03 08:42:36
我做过考马斯亮蓝法对同浓度蛋相同白质不同时间的时间依赖性的疏水性分析，至于ANS恐怕只有用荧光测了，需要多测，最好波长扫描，定激发发射测比较不准，特别是荧光强度不大的情况下
...

考马斯亮蓝法 会不会好做点？
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12楼2014-06-08 18:34:30
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钢琴兔

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by qingqingup at 2014-08-08 14:45:06
请问楼主，您的荧光探针溶解后溶液是什么颜色啊？我也做蛋白疏水行测定这块，但荧光强度非常小，不知是探针有问题还是其他原因，谢谢！

弱弱的橙色  就是很浅很浅的  你买的ANS盐 还是就ANS啊  感觉ANS不好溶啊
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14楼2014-08-09 07:29:31
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钢琴兔

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 答非所问 at 2014-08-10 21:41:03
其实，我们通常都会用一点点氢氧化钠，然后略微调一下PH...

哦 我上次也加氢氧化钠了，就是没调pH
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17楼2014-08-12 08:45:09
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