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想请教一个100*Mg++溶液是什么意思？怎么配制？有点小急，，谢了 已有2人参与
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| 各位高手:本人在做大肠的感受态的时候，要用到这个溶液，现在并不知道怎么配制？有做过的 请多多指教，本人感激不尽！！3Q |
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 分子生化实验经验积累 |
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yudaoqian88
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楼上说的对，100*就是100倍的意思，就是镁盐母液的浓度（有些药品用量大，或者浓度低，为了确保准确，就配制成浓缩的母液，用的时候稀释了用）。我们做感受替俺是是这样做的，其中SOB培养液用LB代替，没事区别。祝好运！ 实验准备：100ml离心管，50ml刻度管，1.5ml离心管，SOB溶液, TB 步骤：（注意：整个实验所有水都必须使用ddH2O） 1. LB板(无抗生素)，划线DH5α，37°倒置培养过夜 2. 挑10-15个单克隆到250ml SOB溶液中（已加MgCl2 和MgSO4,在1 L锥形瓶），20°，250rpm摇到OD600＝0.35-0.45 3. 冰上放置10mins 4. 4°，5000rpm，8mins 5. 弃上清，用80ml冰冷的TB轻轻地在冰上悬浮 6. 冰上放置10mins 7. 4°，4000rpm，8mins 8. 弃上清，用20ml冰冷的TB轻轻地在冰上悬浮 9. 加1.5ml DMSO，混匀 10. 分装。每个预冷的1.5ml离心管加150-200ul 11. 液氮冷冻，-80°保存 试剂配方： SOB液体培养基 (490ml) Tryptone 10g Yeast Extract 2.5g NaCl 0.2922g KCl 0.0932g 调pH7.0, 每个1L锥形瓶分装245ml,灭菌 使用前加入已灭菌的2.5ml 1M MgCl2和2.5ml1M MgSO4 TB 溶液 MW 浓度 （1L） （250ml） PIPES： 335.37 10mM 3.3537g 0.8384g CaCl2: 147.02 15mM 2.2053g 0.5513g KCl: 74.55 250mM 18.6375g 4.6594g Dissolve completely and adjust pH to 6.7 with KOH MnCl2 197.91 55mM 10.8851g 2.7213g Filtration through a 0.45um filter and store at 4° |
4楼2014-04-13 17:21:18
lxj341401
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