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测蔗糖合成酶,但KCN买不到怎么半啊?
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SS合成方向的活性测定参照Lowell等〔13〕和Hubbard等〔5〕的方法,并加以改进。在70μL反应体系中含80 mmol·L- 1Hepes2NaOH缓冲液 (pH 8. 5) , 5 mmol·L- KCN, 5 mmol·L- 1NaF , 100 mmol·L- 1果糖, 15 mmol·L- 1UDP2Glucose ,酶提取液; 30℃反应30 min ,加入70μL 5 mol·L- 1NaOH终止反应,沸水浴10 min ,冷却后加入1 mL 0. 14 %的蒽酮 (溶解在13. 8 mol·L- 1的H2SO4中), 40℃反应20 min ,冷却后测定A620。对照反应体系中不含果糖。都齐了,就差KCN了,卖药品的说是剧毒物,拿不到货!哎,那这么多文章上都用的KCN是从哪弄的啊？纠结!能不能用铁氰化钾代替啊 ？ [ Last edited by 悠悠6690 on 2012-9-7 at 20:42 ] |
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悠悠6690: 回帖置顶 2012-09-09 16:12:47
悠悠6690: 回帖置顶 2012-09-09 16:12:47
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棉纤维中SS（合成方向）活性测定 药品 浓度 体积 药品 浓度 体积 SS 30度保温30min，100度水浴1 min NaoH 2N 0.1ml D-果糖 50mM 0.1ml 沸水浴10min，冷却 UDPG 14mM 0.2ml HCL 30% 3.5 ml HEPES-NaoH Ph7.5 50 mM 0.1ml 间苯二酚 0.1% 1 ml MgCl2 50mM 0.05ml 摇匀，80度水浴10min，A480比色 粗酶液 0.1ml 注：上表左半部中的操作在冰浴中进行 1酶液提取 0.5g（0.2-.04g小麦籽粒），加3mlHepes-NaoH缓冲液（PH7.5），冰浴研磨，加2ml冲洗（共5ml），220rd离心10min（0—4度） 2酶活性测定 原理：UDPG + 果糖 SS 蔗糖 + UDP 绘制标准曲线： 配制1 mg/ml的蔗糖母液，稀释成200 μg/ml，标线浓度梯度为0、20、40、60、80、100、120 μg/ml，与上述方法相同，绘制蔗糖标准曲线，活力以mg sucrose g-1 FW h-1表示。 Hepes 50 mM 2000 mL 用25.83 g D-果糖50 mM 100 mL 用0.9008 g UDPG 14 mM 100 mL用0.7929 g MgCl2 50 mM 100 mL 用1.0165 g NaOH 2N 100 mL用8 g HCl 30% 1000 mL用811 mL37%HCl 间苯二酚 0.1% 500 mL用0.5 g（溶剂为95%乙醇） |
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