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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 农林综合 » 测蔗糖合成酶,但KCN买不到怎么半啊?
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悠悠6690

新虫 (小有名气)

[求助] 测蔗糖合成酶,但KCN买不到怎么半啊?

SS合成方向的活性测定参照Lowell等〔13〕和Hubbard等〔5〕的方法,并加以改进。在70μL反应体系中含80 mmol·L- 1Hepes2NaOH缓冲液 (pH 8. 5) , 5 mmol·L- KCN, 5 mmol·L- 1NaF , 100 mmol·L- 1果糖, 15 mmol·L- 1UDP2Glucose ,酶提取液; 30℃反应30 min ,加入70μL 5 mol·L- 1NaOH终止反应,沸水浴10 min ,冷却后加入1 mL 0. 14 %的蒽酮 (溶解在13. 8 mol·L- 1的H2SO4中), 40℃反应20 min ,冷却后测定A620。对照反应体系中不含果糖。都齐了,就差KCN了,卖药品的说是剧毒物,拿不到货!哎,那这么多文章上都用的KCN是从哪弄的啊？纠结!能不能用铁氰化钾代替啊 ？

[ Last edited by 悠悠6690 on 2012-9-7 at 20:42 ]
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1楼2012-09-07 20:38:53
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娇小玲珑

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
悠悠6690: 回帖置顶 2012-09-09 16:12:47
棉纤维中SS（合成方向）活性测定
药品        浓度        体积                药品        浓度        体积
SS                        30度保温30min，100度水浴1 min        NaoH        2N        0.1ml
D-果糖        50mM        0.1ml                        沸水浴10min，冷却
UDPG        14mM        0.2ml                HCL        30%        3.5 ml
HEPES-NaoH Ph7.5        50 mM        0.1ml                间苯二酚        0.1%        1 ml
MgCl2        50mM        0.05ml                        摇匀，80度水浴10min，A480比色
粗酶液                0.1ml                       
注：上表左半部中的操作在冰浴中进行
1酶液提取
        0.5g（0.2-.04g小麦籽粒），加3mlHepes-NaoH缓冲液（PH7.5），冰浴研磨，加2ml冲洗（共5ml），220rd离心10min（0—4度）
2酶活性测定
原理：UDPG + 果糖      SS    蔗糖 + UDP
绘制标准曲线：
配制1 mg/ml的蔗糖母液，稀释成200 μg/ml，标线浓度梯度为0、20、40、60、80、100、120 μg/ml，与上述方法相同，绘制蔗糖标准曲线，活力以mg sucrose g-1 FW h-1表示。
Hepes 50 mM  2000 mL 用25.83 g
D-果糖50 mM  100 mL 用0.9008 g
UDPG 14 mM 100 mL用0.7929 g
MgCl2 50 mM  100 mL 用1.0165 g
NaOH 2N 100 mL用8 g
HCl  30% 1000 mL用811 mL37%HCl
间苯二酚 0.1% 500 mL用0.5 g（溶剂为95%乙醇）
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3楼2012-09-08 12:42:03
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穿心莲

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是学校里么？不是的话就去高校实验室找，请他们帮忙。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-09-08 00:10:29
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娇小玲珑

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
悠悠6690: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-09-08 16:11:52
方法多的很，为什么找那种买不到药品的方法呢，我刚刚给你发了一个方法，看看吧。如果感觉还行的话就用用吧。我去年就用的这个方法测得。
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4楼2012-09-08 12:44:20
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悠悠6690

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 娇小玲珑 at 2012-09-08 12:44:20
方法多的很，为什么找那种买不到药品的方法呢，我刚刚给你发了一个方法，看看吧。如果感觉还行的话就用用吧。我去年就用的这个方法测得。

恩，刚也看到你这方法了，还可以，呵呵，谢了。
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5楼2012-09-08 16:12:34
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悠悠6690

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 穿心莲 at 2012-09-08 00:10:29
你是学校里么？不是的话就去高校实验室找，请他们帮忙。

我就是纳闷师姐买不到药品，她是怎么把这个方法写到论文里的！
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6楼2012-09-08 16:13:37
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chenypzh

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
KCN是要到公安部门审批才可以采购的，学校应该可以办这个手续！
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7楼2012-09-08 16:31:55
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悠悠6690

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by chenypzh at 2012-09-08 16:31:55
KCN是要到公安部门审批才可以采购的，学校应该可以办这个手续！

这个太麻烦，估计老板那一关就过不了
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8楼2012-09-08 19:08:00
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悠悠6690

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 娇小玲珑 at 2012-09-08 12:42:03
棉纤维中SS（合成方向）活性测定
药品        浓度        体积                药品        浓度        体积
SS                        30度保温30min，100度水浴1 min        NaoH        2N        0.1ml
D-果糖        50mM        0.1ml                        沸水浴10min，冷却
UDPG        14mM        0.2ml                HCL        30%        3.5 ml
HEPES-NaoH Ph ...

你好，我想请教一下，你去年测SS分解方向酶活力时，用的是什么显色剂啊（蒽酮，间苯二酚，还是DNS试剂）？就是UDPG + 果糖      SS    蔗糖 + UDP
的反方向，应该是DNS吧？缓冲液的PH还是7.5么
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9楼2012-09-09 17:13:24
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麦子山

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 穿心莲 at 2012-09-08 00:10:29
你是学校里么？不是的话就去高校实验室找，请他们帮忙。

你知道大概哪里有么？最近做实验也要用 很少就可以啦 但是不好买
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这样美丽负伤的麦子，吐着芳香，站在山岗上
10楼2013-04-03 22:11:04
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