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梁赢

木虫 (正式写手)

[求助] 想请教一个100*Mg++溶液是什么意思?怎么配制?有点小急,,谢了 已有2人参与

各位高手:本人在做大肠的感受态的时候,要用到这个溶液,现在并不知道怎么配制?有做过的 请多多指教,本人感激不尽!!3Q
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
100*是母液,意思是工作浓度的100倍,比如你使用的是1mM,那100*的母液就是配制成100 mM浓度的,使用的时候加总体系的1/100。
2楼2014-04-13 14:29:17
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

这个不是很基础的实验常识吗?
Someone
3楼2014-04-13 17:12:36
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-04-13 18:16:59
gyesang: 回帖置顶 2014-04-13 18:17:12
梁赢: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-13 18:44:53
楼上说的对,100*就是100倍的意思,就是镁盐母液的浓度(有些药品用量大,或者浓度低,为了确保准确,就配制成浓缩的母液,用的时候稀释了用)。我们做感受替俺是是这样做的,其中SOB培养液用LB代替,没事区别。祝好运!
实验准备:100ml离心管,50ml刻度管,1.5ml离心管,SOB溶液, TB
步骤:(注意:整个实验所有水都必须使用ddH2O)
1.        LB板(无抗生素),划线DH5α,37°倒置培养过夜
2.        挑10-15个单克隆到250ml SOB溶液中(已加MgCl2 和MgSO4,在1 L锥形瓶),20°,250rpm摇到OD600=0.35-0.45
3.        冰上放置10mins
4.        4°,5000rpm,8mins
5.        弃上清,用80ml冰冷的TB轻轻地在冰上悬浮
6.        冰上放置10mins
7.        4°,4000rpm,8mins
8.        弃上清,用20ml冰冷的TB轻轻地在冰上悬浮
9.        加1.5ml DMSO,混匀
10.        分装。每个预冷的1.5ml离心管加150-200ul
11.        液氮冷冻,-80°保存


试剂配方:
SOB液体培养基                      (490ml)
Tryptone                                10g
Yeast Extract                             2.5g
NaCl                                  0.2922g
KCl                                   0.0932g
调pH7.0, 每个1L锥形瓶分装245ml,灭菌
使用前加入已灭菌的2.5ml 1M MgCl2和2.5ml1M MgSO4
   
TB 溶液
             MW     浓度     (1L)   (250ml)
PIPES:     335.37   10mM    3.3537g    0.8384g
CaCl2:      147.02    15mM    2.2053g   0.5513g
KCl:        74.55    250mM   18.6375g   4.6594g
Dissolve completely and adjust pH to 6.7 with KOH
MnCl2      197.91    55mM   10.8851g   2.7213g
Filtration through a 0.45um filter and store at 4°
特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
4楼2014-04-13 17:21:18
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