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a406331686

银虫 (小有名气)

[求助] 全长PCR凝胶电泳后全是二聚体,求大神指点 已有7人参与

我想扩增一个基因,全长CDS序列已有,根据全长序列设计的引物F  GGAAGAGCATCCAAAACCG R: AGTGTCTTGCCAACGTCGAT  结果全是引物二聚体,但是想要扩增全长的CDS的话,就这一对引物符合要求,求大神指点咋办,快被逼疯了·····

全长PCR凝胶电泳后全是二聚体,求大神指点
pcr 3.20_副本.jpg
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d00614028

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by a406331686 at 2014-04-10 16:22:34
这个基因的全长CDS才就1089bp,而且它的上游非编码区各种AAA连着,下游也是各种TTT连着,这样的序列到底要怎么弄全长引物啊...

再往外周找,跳出poly区找引物,找长点,看能不能P出来,要是可以的话从P出来的产物里再来P CDs
6楼2014-04-10 16:37:51
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double可

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-10 17:02:03
你的c'DNA是什么啊,可以在CDS区外扩设计引物,感觉你的cDNA有问题
早已不承认还有什么神
2楼2014-04-10 15:21:03
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a406331686

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by double可 at 2014-04-10 15:21:03
你的c'DNA是什么啊,可以在CDS区外扩设计引物,感觉你的cDNA有问题

杨树的cDNA啊,这对引物就是在CDS区外设计的,就这一对在Primer5中的评分还行·····
3楼2014-04-10 15:42:37
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
a406331686: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-10 16:44:52
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-14 17:36:57
a406331686: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-06-15 08:09:26
虽然只有这对引物评分还可以,但还是可以选其他对引物来试试的,PCR有的时候说不清的,哈哈。
实在不行将CDs分成几段,先把每段P出来然后做Overlap。
4楼2014-04-10 16:04:13
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