应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 全长PCR凝胶电泳后全是二聚体，求大神指点
汕头大学海洋科学接受调剂
151/2返回列表12下一页
查看: 2190  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

a406331686

银虫 (小有名气)

[求助] 全长PCR凝胶电泳后全是二聚体，求大神指点 已有7人参与

我想扩增一个基因，全长CDS序列已有，根据全长序列设计的引物F  GGAAGAGCATCCAAAACCG R： AGTGTCTTGCCAACGTCGAT  结果全是引物二聚体，但是想要扩增全长的CDS的话，就这一对引物符合要求，求大神指点咋办，快被逼疯了·····

全长PCR凝胶电泳后全是二聚体，求大神指点
pcr 3.20_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-10 15:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

d00614028

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by a406331686 at 2014-04-10 16:22:34
这个基因的全长CDS才就1089bp，而且它的上游非编码区各种AAA连着，下游也是各种TTT连着，这样的序列到底要怎么弄全长引物啊...

再往外周找，跳出poly区找引物，找长点，看能不能P出来，要是可以的话从P出来的产物里再来P CDs
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-04-10 16:37:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

double可

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-10 17:02:03
你的c'DNA是什么啊，可以在CDS区外扩设计引物，感觉你的cDNA有问题
赞一下 回复此楼
早已不承认还有什么神
2楼2014-04-10 15:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by double可 at 2014-04-10 15:21:03
你的c'DNA是什么啊，可以在CDS区外扩设计引物，感觉你的cDNA有问题

杨树的cDNA啊，这对引物就是在CDS区外设计的，就这一对在Primer5中的评分还行·····
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-10 15:42:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
a406331686: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-10 16:44:52
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-14 17:36:57
a406331686: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-06-15 08:09:26
虽然只有这对引物评分还可以，但还是可以选其他对引物来试试的，PCR有的时候说不清的，哈哈。
实在不行将CDs分成几段，先把每段P出来然后做Overlap。
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-10 16:04:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 16:04:13
虽然只有这对引物评分还可以，但还是可以选其他对引物来试试的，PCR有的时候说不清的，哈哈。
实在不行将CDs分成几段，先把每段P出来然后做Overlap。

这个基因的全长CDS才就1089bp，而且它的上游非编码区各种AAA连着，下游也是各种TTT连着，这样的序列到底要怎么弄全长引物啊
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-10 16:22:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 16:37:51
再往外周找，跳出poly区找引物，找长点，看能不能P出来，要是可以的话从P出来的产物里再来P CDs...

NCBI上杨树基因组序列里这个基因的全长也就1300多bp，你说的跳出poly区是指哪个区域啊
赞一下 回复此楼
7楼2014-04-10 16:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by a406331686 at 2014-04-10 16:43:34
NCBI上杨树基因组序列里这个基因的全长也就1300多bp，你说的跳出poly区是指哪个区域啊...

往它的上下游找试试。
赞一下 回复此楼
8楼2014-04-10 16:48:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 16:48:13
往它的上下游找试试。...

他的上下游没了啊·······
赞一下 回复此楼
9楼2014-04-10 16:51:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

double可

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by a406331686 at 2014-04-10 15:42:37
杨树的cDNA啊，这对引物就是在CDS区外设计的，就这一对在Primer5中的评分还行·····...

可能你的cDNA提取有问题所以才没有p出条带，条带成弥散有的还在空中有可能有基因组污染
赞一下 回复此楼
早已不承认还有什么神
10楼2014-04-10 18:01:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 a406331686 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂求收留 +33 果然有我 2026-04-10 34/1700 2026-04-15 00:37 by zzzggc
[考研] 211本科材料化工求调剂 +19 YHLAH 2026-04-11 23/1150 2026-04-14 22:25 by fenglj492
[考研] 08工学 309分求调剂 +12 Yin DY 2026-04-08 12/600 2026-04-14 17:49 by lhj2009
[考研] 367求调剂 +11 hffQAQ 2026-04-09 11/550 2026-04-14 17:48 by lhj2009
[考研] 271求调剂 +29 2261744733 2026-04-11 29/1450 2026-04-14 16:48 by zhouxiaoyu
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 食品与营养（0955）271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] 300分求调剂 （085501机械专硕，本科扬大） +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu～
[考研] 材料复试求调剂 +24 xhhdjdjsjks 2026-04-09 24/1200 2026-04-13 15:49 by 幸免 ..
[考研] 297工科，求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 11/550 2026-04-11 19:57 by 逆水乘风
[考研] 087100初试311求调剂 +4 任雅琴 2026-04-09 4/200 2026-04-11 10:33 by zhq0425
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 一志愿矿大，材料工程专硕314分，0856可调都可以 +15 无懈可击的巨人 2026-04-09 15/750 2026-04-10 18:10 by hmn_wj
[考研] 青岛科技大学材料学院，环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 本科西工大 0856 324求调剂 +10 wysyjs25 2026-04-09 11/550 2026-04-10 08:37 by 5268321
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭