应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 全长PCR凝胶电泳后全是二聚体，求大神指点
151/2返回列表12下一页
查看: 2132  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

a406331686

银虫 (小有名气)

[求助] 全长PCR凝胶电泳后全是二聚体，求大神指点 已有7人参与

我想扩增一个基因，全长CDS序列已有，根据全长序列设计的引物F  GGAAGAGCATCCAAAACCG R： AGTGTCTTGCCAACGTCGAT  结果全是引物二聚体，但是想要扩增全长的CDS的话，就这一对引物符合要求，求大神指点咋办，快被逼疯了·····

全长PCR凝胶电泳后全是二聚体，求大神指点
pcr 3.20_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-10 15:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

d00614028

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by a406331686 at 2014-04-10 16:22:34
这个基因的全长CDS才就1089bp，而且它的上游非编码区各种AAA连着，下游也是各种TTT连着，这样的序列到底要怎么弄全长引物啊...

再往外周找，跳出poly区找引物，找长点，看能不能P出来，要是可以的话从P出来的产物里再来P CDs
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-04-10 16:37:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

double可

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-10 17:02:03
你的c'DNA是什么啊，可以在CDS区外扩设计引物，感觉你的cDNA有问题
赞一下 回复此楼
早已不承认还有什么神
2楼2014-04-10 15:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by double可 at 2014-04-10 15:21:03
你的c'DNA是什么啊，可以在CDS区外扩设计引物，感觉你的cDNA有问题

杨树的cDNA啊，这对引物就是在CDS区外设计的，就这一对在Primer5中的评分还行·····
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-10 15:42:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
a406331686: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-10 16:44:52
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-14 17:36:57
a406331686: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-06-15 08:09:26
虽然只有这对引物评分还可以，但还是可以选其他对引物来试试的，PCR有的时候说不清的，哈哈。
实在不行将CDs分成几段，先把每段P出来然后做Overlap。
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-10 16:04:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 16:04:13
虽然只有这对引物评分还可以，但还是可以选其他对引物来试试的，PCR有的时候说不清的，哈哈。
实在不行将CDs分成几段，先把每段P出来然后做Overlap。

这个基因的全长CDS才就1089bp，而且它的上游非编码区各种AAA连着，下游也是各种TTT连着，这样的序列到底要怎么弄全长引物啊
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-10 16:22:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 16:37:51
再往外周找，跳出poly区找引物，找长点，看能不能P出来，要是可以的话从P出来的产物里再来P CDs...

NCBI上杨树基因组序列里这个基因的全长也就1300多bp，你说的跳出poly区是指哪个区域啊
赞一下 回复此楼
7楼2014-04-10 16:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by a406331686 at 2014-04-10 16:43:34
NCBI上杨树基因组序列里这个基因的全长也就1300多bp，你说的跳出poly区是指哪个区域啊...

往它的上下游找试试。
赞一下 回复此楼
8楼2014-04-10 16:48:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a406331686

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 16:48:13
往它的上下游找试试。...

他的上下游没了啊·······
赞一下 回复此楼
9楼2014-04-10 16:51:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

double可

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by a406331686 at 2014-04-10 15:42:37
杨树的cDNA啊，这对引物就是在CDS区外设计的，就这一对在Primer5中的评分还行·····...

可能你的cDNA提取有问题所以才没有p出条带，条带成弥散有的还在空中有可能有基因组污染
赞一下 回复此楼
早已不承认还有什么神
10楼2014-04-10 18:01:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 a406331686 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 0854电子信息求调剂 +3 α____ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:28 by zhq0425
[考研] 284求调剂 +5 Zhao anqi 2026-03-22 5/250 2026-03-22 17:38 by barlinike
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 4/200 2026-03-22 11:04 by 搏击518
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭