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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 全长PCR凝胶电泳后全是二聚体，求大神指点
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查看: 2017  |  回复: 14
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
a406331686: 金币+2, ★有帮助 2014-04-14 21:59:55
引用回帖:
10楼: Originally posted by double可 at 2014-04-10 18:01:14
可能你的cDNA提取有问题所以才没有p出条带，条带成弥散有的还在空中有可能有基因组污染...

把你的RNA图片贴出来看看，引物设计可能存在问题，既然是已知序列，何不用primer-blast设计引物，退火温度设计高一点容易拿到

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2014-04-10 18:55:33
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
a406331686(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-14 17:37:33
a406331686: 金币+2, ★有帮助 2014-04-14 21:59:16
CDS只是cDNA内的一部分，看看能不能把引物往CDS两端外移动。
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12楼2014-04-14 16:21:30
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hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是你扩增的模板有问题，换个模板试试呗
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scienceguy
13楼2014-04-14 16:46:27
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
a406331686(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-14 17:37:19
a406331686: 金币+3, ★有帮助 2014-04-14 21:58:49
引物二聚体出现，说明引物没有完全被用来参与扩增，可能模版太多。
可以试试提高退火温度，一般可以解决掉二聚体。
同时，注意一下引物是否合适，浓度不要太高。
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14楼2014-04-14 17:14:31
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程家大小姐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引物二聚体的话试试加上DMSO，能P出来的，另外退火温度做个梯度，尽量小一点试试看。
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15楼2014-06-13 17:59:22
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