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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 已知米氏常数Km,底物浓度如何确定
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恰恰

金虫 (正式写手)

[求助] 已知米氏常数Km,底物浓度如何确定 已有1人参与

书上说米氏常数Km值是酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度；在酶浓度及其他条件不变的情况下，底物浓度与反应速度的相互关系，可用矩形双曲线表示。在底物浓度很低时，反应速度随着底物浓度的增加而增加，两者是正比关系。随着底物浓度的继续升高，反应速度的增加趋势渐缓，再加大底物浓度，反应速度不再增加，逐渐趋于恒定。

      头一回接触这个问题，查阅文献得知酶的米氏常数为20uM, 想请教大家底物浓度是怎么确定的，如果底物定200nM，反应速度肯定会慢许多，这个做可行吗
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1楼 2014-03-26 11:03:26
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做酶动力学实验的时候，要预估km的值，然后取(1/10)km到10km的浓度做实验，再来做实验确定Vmax和Km。
一般蛋白的Km值，和它在自然界里的底物浓度处于一个范围。
如果你做实验是想达到最大速度，如果不存在底物抑制的情况下，用10Km的底物浓度就足够了。
如果你要测蛋白质活性，根据我开头说的那个范围试试看先？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-03-26 14:14:05
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恰恰

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-03-26 14:14:05
做酶动力学实验的时候，要预估km的值，然后取(1/10)km到10km的浓度做实验，再来做实验确定Vmax和Km。
一般蛋白的Km值，和它在自然界里的底物浓度处于一个范围。
如果你做实验是想达到最大速度，如果不存在底物抑制 ...

您好，感谢您的回复，我的目的是要测酶的活性。因为实验的特殊性，底物浓度不能太高，理想的情形是浓度为(1/10)km，如果设定为这样的浓度，反应速度肯定是要慢一些的，不知道这样做实验对不对。
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3楼2014-03-26 15:20:23
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
恰恰: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-03-26 17:13:08
不能说不能测，但是测的误差会很大，如果写成文稿评委问你，解释起来可能会很费事。
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2014-03-26 15:33:29
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欧mi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-03-26 14:14:05
做酶动力学实验的时候，要预估km的值，然后取(1/10)km到10km的浓度做实验，再来做实验确定Vmax和Km。
一般蛋白的Km值，和它在自然界里的底物浓度处于一个范围。
如果你做实验是想达到最大速度，如果不存在底物抑制 ...

请问，测量Km值时，酶的浓度应该怎么定下来？
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5楼2018-07-28 23:23:08
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