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恰恰

金虫 (正式写手)

[求助] 已知米氏常数Km,底物浓度如何确定已有1人参与

书上说米氏常数Km值是酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度;在酶浓度及其他条件不变的情况下,底物浓度与反应速度的相互关系,可用矩形双曲线表示。在底物浓度很低时,反应速度随着底物浓度的增加而增加,两者是正比关系。随着底物浓度的继续升高,反应速度的增加趋势渐缓,再加大底物浓度,反应速度不再增加,逐渐趋于恒定。

      头一回接触这个问题,查阅文献得知酶的米氏常数为20uM, 想请教大家底物浓度是怎么确定的,如果底物定200nM,反应速度肯定会慢许多,这个做可行吗
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
恰恰: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-03-26 17:13:08
不能说不能测,但是测的误差会很大,如果写成文稿评委问你,解释起来可能会很费事。
行至水穷处,坐看云起时
4楼2014-03-26 15:33:29
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做酶动力学实验的时候,要预估km的值,然后取(1/10)km到10km的浓度做实验,再来做实验确定Vmax和Km。
一般蛋白的Km值,和它在自然界里的底物浓度处于一个范围。
如果你做实验是想达到最大速度,如果不存在底物抑制的情况下,用10Km的底物浓度就足够了。
如果你要测蛋白质活性,根据我开头说的那个范围试试看先?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-03-26 14:14:05
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恰恰

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-03-26 14:14:05
做酶动力学实验的时候,要预估km的值,然后取(1/10)km到10km的浓度做实验,再来做实验确定Vmax和Km。
一般蛋白的Km值,和它在自然界里的底物浓度处于一个范围。
如果你做实验是想达到最大速度,如果不存在底物抑制 ...

您好,感谢您的回复,我的目的是要测酶的活性。因为实验的特殊性,底物浓度不能太高,理想的情形是浓度为(1/10)km,如果设定为这样的浓度,反应速度肯定是要慢一些的,不知道这样做实验对不对。
3楼2014-03-26 15:20:23
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欧mi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-03-26 14:14:05
做酶动力学实验的时候,要预估km的值,然后取(1/10)km到10km的浓度做实验,再来做实验确定Vmax和Km。
一般蛋白的Km值,和它在自然界里的底物浓度处于一个范围。
如果你做实验是想达到最大速度,如果不存在底物抑制 ...

请问,测量Km值时,酶的浓度应该怎么定下来?
5楼2018-07-28 23:23:08
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