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huihui2255365

金虫 (小有名气)

[求助] hplc转到uplc的洗脱问题 已有3人参与

1是对照品,2是样品
根据HPLC的条件转化成UPLC条件得的,不知道怎样才能有效利用UPLC的快速呢?20分钟太长了,我试着把乙腈比例加大,但是基线不平稳不说,样品19 min那个峰洗不出来,全是杂峰,请高手指点谢谢!!!
HPLC的条件:
0~10 min 乙腈:0.2%磷酸 5:95
10~15 min 乙腈:0.2%磷酸12:88
15~50 min 乙腈:0.2%磷酸 12:88
UPLC条件:
0~5 min 乙腈:0.2%磷酸 5:95
5~10 min 乙腈:0.2%磷酸12:88
10~30 min 乙腈:0.2%磷酸12:88



hplc转到uplc的洗脱问题
1.jpg


hplc转到uplc的洗脱问题-1
2.jpg
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huihui2255365

金虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by lifucheng at 2014-03-19 13:00:51
waters的UPLC可以自己转换出UPLC方法啊 而且您这个图是用e2695做的吧

是UPLC啊
就是转换了之后也是这个时间
5楼2014-03-19 14:48:18
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huihui2255365

金虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-19 13:20:18
HPLC转为UPLC后,不用保持出峰时间一致,保留时间长就加大流速,在一个看你的谱图你uplc对你20分钟的峰选择性不好啊,HPLC分的不错啊 为什么要换方法。

因为我这只有UPLC,HPLC的方法是从别人做的
6楼2014-03-19 14:49:19
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huihui2255365

金虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by wyy080214 at 2014-03-19 13:47:11
很简单哦,增加流动相中乙腈的初始比例

我之前试过10%乙腈,结果后面哪个峰不行
7楼2014-03-19 14:53:44
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huihui2255365

金虫 (小有名气)

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8楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-20 07:51:56
用的是超高效液相色谱柱吗?...

是啊,waters BEH C18 (2.1×100 mm 1.7 μm)
9楼2014-03-20 08:22:11
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huihui2255365

金虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-20 09:11:27
你现在用的是0.3的流速吗,好像梯度还得改改。...

我是0.2的流速,我是想怎样能有效利用UPLC能让这两个峰出峰间隔不要这么长,样品是个植物样品,有没有什么好建议
11楼2014-03-20 11:33:17
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huihui2255365

金虫 (小有名气)

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12楼: Originally posted by 炜少 at 2014-03-20 13:05:32
一个是提高有机相浓度,一个是改变流速,第一个峰出来以后加大流速。...

我下午把条件改了
2 min  0.25 ml/min   乙腈:0.2磷酸=5:95
3 min 0.35 ml/min   乙腈:0.2磷酸=5:95
5 min 0.35  ml/min  乙腈:0.2磷酸=5:95
6 min 0.35 ml/min   乙腈:0.2磷酸=13:95
然后13分钟出完峰,乙腈的比例不敢再加大,由于梯度变化,样品在8min的时候基线还是不稳,明天再试试看甲醇做流动相好不好分
还有个问题,我很少用到0.35这个流速,这时候压力都到8000 psi了,不知道会不会上柱子?我洗柱子的时候以前都是0.2的流速,现在这个梯度的话洗柱子还继续0.2还是换到0.35才能洗的比较干净呢?谢谢啦
13楼2014-03-20 16:56:11
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