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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 液相HPLC 的两个峰太近了分不开 求高人指点！ 有图
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zjytiantang

金虫 (小有名气)

[交流] 液相HPLC 的两个峰太近了分不开 求高人指点！ 有图

液相HPLC的两个峰离着太近了分不开，求高人指点！
而且保留时间一直是2分多，C18的柱子，流动相从全甲醇~甲醇水~全水，都试过了 现在不想管保留时间了，就想把两个峰分开~ 希望各位大侠多多指点！
样品是没衍生的组氨酸，组氨酸和一个结构改造的组氨酸跑的。

psb.jpg

[ Last edited by zjytiantang on 2012-12-3 at 11:26 ]
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1楼 2012-12-03 09:02:21
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valley_chow

金虫 (正式写手)
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zjytiantang: 金币+4, 谢谢啦 我去查查全文 2012-12-03 13:56:32
组氨酸想做好要衍生化的，不衍生化的就要特殊柱子或者流动相。附一个方法给你参考。
本发明提供了一种用ＨＰＬＣ法分析精氨酸、盐酸精氨酸原料及制剂的方法，所述的分析方法选用ＬｉＣｈｒｏＣＡＲＴ２５０－４，ＮＨ２，５μｍ，４．０×２５０ｍｍ氨基色谱分离柱，以不同ｐＨ的有机相和不同离子浓度的缓冲液作为流动相，其中有机相为甲醇、乙醇和乙腈，缓冲液为磷酸氢二铵溶液。所述的分析方法的具体操作步骤如下：（１）取精氨酸４．１２－４．２０ｍｇ、组氨酸４．１３－４．２５ｍｇ和盐酸赖氨酸４．１２－４．３７ｍｇ加流动相２０ｍｌ溶解并混匀，制成每１ｍｌ溶液中含精氨酸为０．２０６ｍｇ／ｍｌ－０．２１ｍｇ／ｍｌ、组氨酸为０．２０６ｍｇ／ｍｌ－０．２１２ｍｇ／ｍｌ和盐酸赖氨酸为０．２０６ｍｇ／ｍｌ－０．２１５ｍｇ／ｍｌ的混合溶液，作为分析溶液；（２）设置流动相流速为０．８－１．２ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为２０５ｎｍ，柱温为１５－２５°Ｃ；（３）取制成的分析溶液５－４０μＬ注入液相色谱仪中，进行色谱分析，并记录色谱图。
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10楼2012-12-03 12:17:18
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wanghq121

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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zjytiantang: 金币+1 2012-12-03 10:48:26
先用甲醇-水来跑，你这个柱子根本吸收就出来，甲醇太高了。
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2楼2012-12-03 09:26:40
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wjg6670

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
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zjytiantang: 金币+1, 跑的是没有衍生的氨基酸 是同一种氨基酸 就是氨基酸结构稍稍做了修改 2012-12-03 10:50:13
物质没被保留，2.5min就想分离，和死时间差不多，UPLC差不多。让别人给建议至少提供分析对象吧。
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3楼2012-12-03 09:30:32
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32862500

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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zjytiantang: 金币+1, 缓冲盐和离子对是什么呢~ 是试剂么 我不太懂分析~ 3Q啦 2012-12-03 10:51:05
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来分析版交流 2012-12-03 20:33:19
你的物质没保留 可以参考如下几种方法
1  换柱，这么短的时间是不能分开的（如亲水柱）
2  换流动相，用缓冲盐或者离子对
3 用正相来体系来试试
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4楼2012-12-03 09:37:38
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波斯米亚

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
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zjytiantang: 金币+1, 计量学的方法 是不是需要梯度洗脱呢 这个2.5分钟就出峰太早了，梯度洗脱不好用啊 2012-12-03 10:52:13
个人觉得这个甲醇-水或者乙腈-水的体系绝对能跑出来 最好避免太短出峰啊 你这个图上的不知道是什么条件
要是都不行可以用点计量学的方法 分开不难~~
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5楼2012-12-03 09:40:47
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protein408

铜虫 (小有名气)
★ ★
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zjytiantang: 金币+1, 嗯嗯 3Q 2012-12-03 10:53:23
图看不见，但是通过你的描述可以从以下几点考虑：1.根据分析物的性质，看看你选的柱子是否合适，现在出峰时间实在太早了；2.流动相的选择是否合适；3.流动相的比例是否合适；4.考虑一下用梯度洗脱。
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6楼2012-12-03 10:03:32
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hxl4054

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★
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zjytiantang: 金币+1, 嗯嗯 降低流速会不会好些呢 2012-12-03 11:25:05
兄弟  是不是没怎么跑过液相啊

看你的图里面至少有3个组分

2.5分钟出峰确实太早了  几乎不可能分开

根据你说的“保留时间一直是2分多，C18的柱子，流动相从全甲醇~甲醇水~全水”，可能是柱子不行了，有条件的话换根柱子试试

或者根据你的化合物结构，调整一下流动相，加点酸或碱，说不定效果好很多
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8楼2012-12-03 10:46:05
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love雨的旋律

铜虫 (初入文坛)
★
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换个25或30cm的长柱子试试。在药典里查一下，类似的结构用什么类型的色谱柱及流动相。
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9楼2012-12-03 10:54:29
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波斯米亚

铁杆木虫 (著名写手)
★
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计量学的方法参考下PARAFAC和ATLD 分辨你这个图肯定是没问题 跑不跑梯度均可 不过感觉你这个貌似用不到 不跑梯度都能出来的~~
还是得明确下 你的实际体系后面一个峰 可能还有其他物质 要么就是峰型比较难看 加酸碱缓冲液 有时能改变下峰型 既然你对时间没要求的话 可以先用水相跑 再换有机相
另外一个要说的同上面的虫友 全水的话保留时间也是这样 很可能是柱效太低了 换个柱子 长短柱都可以试下~~ 感觉就是性质极其类似的东西也不会全水到全有机相都是一个保留时间 柱子的问题可能性大~
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11楼2012-12-03 12:43:40
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嘟嘟才靖

铜虫 (小有名气)
★
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建议换个柱子试试
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12楼2013-02-18 10:30:44
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chemer

木虫 (正式写手)
组氨酸极性很大在反相柱上保留很小，可以考虑在流动相中加入离子对试剂并调节pH值，可使两个化合物达到完全分离
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13楼2013-02-18 11:13:16
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简单回复
su-b087楼
2012-12-03 10:42   回复  
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