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ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot的阴性对照怎么设计啊？ 已有2人参与

本人在做视蛋白的原核表达，在做western blot时需要设计一个阴性对照，想请教各位大侠要怎么设计啊？直接的大肠杆菌不加质粒？？？我的重组蛋白没有加IPTG诱导和加了IPTG诱导都处理目的条带啊~~框框部分是目的条带，Mark后面的是蛋白，奇数条带没有IPTG，偶数有IPTG。Mark前面是空白质粒加了IPTG的，大家帮忙分析分析，再帮我看看要怎么设计阴性对照，谢谢呐~~~
western blot的阴性对照怎么设计啊？
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1楼 2014-03-11 10:09:44
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ginnyzhuzhu: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-03-12 14:41:51
无载体菌加IPTG诱导可以作为阴性对照。不过你用的抗体质量太差了，满板都是杂交条带，这样设置好阴性对照也没有什么用的。
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4楼2014-03-12 13:44:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ginnyzhuzhu(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-11 12:24:37
ginnyzhuzhu: 金币+1, ★有帮助 2014-03-11 14:49:43
阴性不加IPTG，你的实验不成功
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2楼2014-03-11 12:15:31
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ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-03-11 12:15:31
阴性不加IPTG，你的实验不成功

没有IPTG诱导不是也可以有本底表达的嘛？
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3楼2014-03-11 14:48:53
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ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liuderong at 2014-03-12 13:44:57
无载体菌加IPTG诱导可以作为阴性对照。不过你用的抗体质量太差了，满板都是杂交条带，这样设置好阴性对照也没有什么用的。

谢谢！那我再做个有对照的实验看看。抗体买的是国产天根的。。。杂带估计也跟显色时间长有关。
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5楼2014-03-12 14:43:48
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