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neurovas金虫 (小有名气)
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求助帖，看看这段话什么意思？ 已有1人参与
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Hemoglobin from bovine blood was obtained from Sigma. Methemoglobin was prepared by oxidation of Hb with a 2-fold excess of potassium ferricyanide and passage through a Sephadex G-25 column using 10 mM phosphate buffer (pH 7.0) as an eluent. Oxyhemoglobin was obtained by reduction of Hb with a 10-fold excess of sodium dithionite. The solution was then bubbled with O2 and purified on a Sephadex G-25 column. Concentrations of metHb and oxyHb were determined spectrophotometrically using ε405 = 1.79 × 105 M–1 cm–1 and ε500 = 1.00 × 104 M–1 cm–1 for metHb, ε415 = 1.25 × 105 M–1 cm–1 and ε577 = 1.38 × 104 M–1 cm–1 for oxyHb, b, expressed per heme (Antonini & Brunori, 1971). FerrylHb was prepared by incubation 1.5 × 10–5 M MetHb with an equimolar amount of H2O2 in relation to the heme group in 10 mM phosphate buffer at room temperature for 5 min (Sztiller et al., 2006). 重点是 ε415 = 1.25 × 105 M–1 cm–1 and ε577 = 1.38 × 104 M–1 cm–1 for oxyHb, 测完这两个值之后，是相加得出oxyHb的浓度吗？文章里面似乎并没有讲清楚。求助各位高手给解决一下！ 下面附有全文！谢谢！ |
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2014-03-08 20:16:28, 871.61 K
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【答案】应助回帖
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neurovas: 金币+9, ★★★★★最佳答案 2014-03-21 20:29:13
neurovas: 金币+9, ★★★★★最佳答案 2014-03-21 20:29:13
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我谈谈我的理解 很明显这两个epsilon值相差很大 ε405 = 1.79 × 105 M–1 cm–1 and ε500 = 1.00 × 104 M–1 cm–1 for metHb, 这里405nm是文中提到的max值，理论上测这个值就可以算出metHb的浓度 但是这里有一个问题，就是他metHb是怎么来的？ 他是从Hb氧化而来，而Hb在这个区段同样有很强的光吸收，只要是反应，就不可能是100%的， 所以我觉得他后面选的那个500nm，应该是选的对MetHb而言光吸收很少，但是Hb还有相当光吸收的区段，等于这个是测光的本底，要把405nm处测的MetHb+Hb，减去500 nm处测的Hb本底。 ε415 = 1.25 × 105 M–1 cm–1 and ε577 = 1.38 × 104 M–1 cm–1 for oxyHb, 这个应该是同理 我找到的Hb和OxyHb的吸收光谱图 很明显到了577nm，OxyHb的光吸收已经很少，而Hb还有相当的光吸收。 供你参考！  QQ截图20140321151039.png |
5楼2014-03-21 15:11:57
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有看过这篇paper么? http://www.sciencedirect.com/sci ... i/S0014579398813458 也提到类似的东西，或许可以给你一点提示…… |
2楼2014-03-21 07:45:45
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