24小时热门版块排行榜    

查看: 1851  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小雨莎莎

木虫 (正式写手)

[求助] 请教WB方面的一些小细节问题 已有2人参与

请教各位高手,做WB时,滤纸的厚度会对转膜的效率有影响么?因为前两天做WB,用的是Bio-rad的配套的厚滤纸,湿法转膜,10%的胶,蛋白140KD,100V恒压,1h左右,用的是Femantas的大分子量到300KD的预染marker,70KD和100KD的marker是很清晰的,但是后来临时换了whatman的薄滤纸,同样还是左右各三层滤纸,相同的转膜条件,但是marker就不见了,胶上也没有,请问是因为滤纸薄所以容易转过么?还是别的什么原因?今天重复了一次,左右两边放四层滤纸,勉强能看到一点点marker,但是封闭几小时之后几乎就看不到了,很是郁闷,请问如何解决呢?转膜缓冲液是常用的那种20%甲醇的,含有SDS的那种。谢谢啦!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weihaie

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小雨莎莎: 金币+2, 有帮助, 3Q 2014-03-07 18:12:31
个人觉得滤纸的厚度有很大的关系,你可以染膜或者染胶试试,看看是转过了,还是没转上去
巴拉拉小魔仙的魔法棒
3楼2014-03-06 09:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

better8392

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小雨莎莎: 金币+2, 有帮助, 3Q 2014-03-07 18:12:12
我觉得滤纸的薄厚并不是影响你蛋白marker消失的原因,marker消失了,有可能是你的marker降解了,你两次用的是同一管marker吗?
还有就是你不注意电极插反了,所以导致不管是胶上还是膜上都看不见。
还有就是你的转膜缓冲液是否可以要换一下,里面有SDS可能会影响你的转膜效率。你可以考虑用不含SDS的转膜缓冲液。那样转膜的效率会高一点。
天行健君子以自强不息,地势坤君子以厚德载物
2楼2014-03-06 08:59:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小雨莎莎

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by better8392 at 2014-03-06 08:59:04
我觉得滤纸的薄厚并不是影响你蛋白marker消失的原因,marker消失了,有可能是你的marker降解了,你两次用的是同一管marker吗?
还有就是你不注意电极插反了,所以导致不管是胶上还是膜上都看不见。
还有就是你的转 ...

两次用的都是同一管呢,电极跟板子什么的也没有插反。如果说SDS的话,那之前用Bio-rad的滤纸转同样的转膜液,效果也挺好的哦~~
4楼2014-03-07 18:12:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小雨莎莎

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by weihaie at 2014-03-06 09:44:16
个人觉得滤纸的厚度有很大的关系,你可以染膜或者染胶试试,看看是转过了,还是没转上去

谢谢!我下回试试!
5楼2014-03-07 18:12:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 271材料工程求调剂 +5 .6lL 2026-03-18 5/250 2026-03-19 03:07 by 无懈可击111
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +3 xbxudjdn 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:14 by zhq0425
[考研] 一志愿中国海洋大学,生物学,301分,求调剂 +4 1孙悟空 2026-03-17 4/200 2026-03-18 17:59 by fivewind
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 9/450 2026-03-18 15:31 by vgtyfty
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生,2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
信息提示
请填处理意见