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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 请教WB方面的一些小细节问题
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)

[求助] 请教WB方面的一些小细节问题 已有2人参与

请教各位高手，做WB时，滤纸的厚度会对转膜的效率有影响么？因为前两天做WB，用的是Bio-rad的配套的厚滤纸，湿法转膜，10%的胶，蛋白140KD，100V恒压，1h左右，用的是Femantas的大分子量到300KD的预染marker，70KD和100KD的marker是很清晰的，但是后来临时换了whatman的薄滤纸，同样还是左右各三层滤纸，相同的转膜条件，但是marker就不见了，胶上也没有，请问是因为滤纸薄所以容易转过么？还是别的什么原因？今天重复了一次，左右两边放四层滤纸，勉强能看到一点点marker，但是封闭几小时之后几乎就看不到了，很是郁闷，请问如何解决呢？转膜缓冲液是常用的那种２０％甲醇的，含有ＳＤＳ的那种。谢谢啦！
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1楼 2014-03-05 22:40:37
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better8392

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小雨莎莎: 金币+2, ★有帮助, 3Q 2014-03-07 18:12:12
我觉得滤纸的薄厚并不是影响你蛋白marker消失的原因，marker消失了，有可能是你的marker降解了，你两次用的是同一管marker吗？
还有就是你不注意电极插反了，所以导致不管是胶上还是膜上都看不见。
还有就是你的转膜缓冲液是否可以要换一下，里面有SDS可能会影响你的转膜效率。你可以考虑用不含SDS的转膜缓冲液。那样转膜的效率会高一点。
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天行健君子以自强不息，地势坤君子以厚德载物
2楼2014-03-06 08:59:04
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weihaie

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小雨莎莎: 金币+2, ★有帮助, 3Q 2014-03-07 18:12:31
个人觉得滤纸的厚度有很大的关系，你可以染膜或者染胶试试，看看是转过了，还是没转上去
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巴拉拉小魔仙的魔法棒
3楼2014-03-06 09:44:16
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by better8392 at 2014-03-06 08:59:04
我觉得滤纸的薄厚并不是影响你蛋白marker消失的原因，marker消失了，有可能是你的marker降解了，你两次用的是同一管marker吗？
还有就是你不注意电极插反了，所以导致不管是胶上还是膜上都看不见。
还有就是你的转 ...

两次用的都是同一管呢，电极跟板子什么的也没有插反。如果说SDS的话，那之前用Bio-rad的滤纸转同样的转膜液，效果也挺好的哦~~
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4楼2014-03-07 18:12:02
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weihaie at 2014-03-06 09:44:16
个人觉得滤纸的厚度有很大的关系，你可以染膜或者染胶试试，看看是转过了，还是没转上去

谢谢！我下回试试！
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5楼2014-03-07 18:12:22
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