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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒pMD19的测序引物，RV-M 和M13F(-47)指的是质粒什么位置的引物
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永远一片天

新虫 (正式写手)

[求助] 质粒pMD19的测序引物，RV-M 和M13F(-47)指的是质粒什么位置的引物 已有3人参与

质粒pMD19的测序引物，RV-M 和M13F(-47)指的是质粒什么位置的引物，它们之间的距离有多少bp碱基，我转化了一段440bp片段的DNA用这两条引物测序，测序结果是1200多bp,pMD19质粒就2697bp了，为什么测序结果那么短，奇怪的是这段序列里面正好包含我的那段DNA序列。
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1楼 2014-02-22 10:57:57
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 16:02:11
pMD19载体上下游有M13(-47)和M13(-48)距插入位点各有五六十bp。
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hehe
4楼2014-02-22 19:21:49
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是根据载体上的序列设计的引物，分别位于你目的基因是上下游，正好可以测出你基因的序列，她不会把所有的载体序列都给你测出来的
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-02-22 14:50:34
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 16:01:52
gyesang: 回帖置顶 2014-03-30 16:02:04
这两个引物分别位于你转化片段左右两侧50bp左右。测序的话，你需要的是两测序引物之间的片段，大约550bp。

测序结果是1200多bp的原因在于：当用RV-M测的时候，从该引物开始，一般后续的800-1000 bp是可用的；M13F(-47)亦如是；拼接后大概得到1200bp可用序列，包括目的片段及其左右两端的部分载体序列。
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做一个阳光、开朗的小和尚
3楼2014-02-22 19:09:41
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