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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双分子荧光技术
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

[求助] 双分子荧光技术 已有2人参与

请问做个这个吗？为什么感觉VN173和VC155的质粒不好切呢
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1楼 2014-02-20 16:04:03
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没有不好切的质粒
只有不给力的酶
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2楼2014-02-20 21:06:58
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2014-02-20 21:06:58
没有不好切的质粒
只有不给力的酶

酶都是做实验常用的，其他质粒很好切啊
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3楼2014-02-21 10:36:34
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kehan777

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-02-23 23:58:00
最近才用过这两个质粒，没有问题。你切的体系，时间，温度等再调节一下吧
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4楼2014-02-23 21:07:07
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kehan777 at 2014-02-23 21:07:07
最近才用过这两个质粒，没有问题。你切的体系，时间，温度等再调节一下吧

是吗，我一直用40的体系切20微升，37度过夜，0.5的酶。请问你是怎么切的？能详细说一下吗，多谢
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5楼2014-02-24 10:25:33
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kehan777

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-02-24 10:25:33
是吗，我一直用40的体系切20微升，37度过夜，0.5的酶。请问你是怎么切的？能详细说一下吗，多谢...

质粒切1μg，50μl体系，酶各1μl，可以切久一点，3.5~4小时。
目的片段用P出来的产物，胶回收或纯化后，40μl全量切，用50μl体系，酶各1μl，3小时就可以了。然后胶回收，测一下浓度，3：1连接。
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6楼2014-02-27 20:37:32
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by kehan777 at 2014-02-27 20:37:32
质粒切1μg，50μl体系，酶各1μl，可以切久一点，3.5~4小时。
目的片段用P出来的产物，胶回收或纯化后，40μl全量切，用50μl体系，酶各1μl，3小时就可以了。然后胶回收，测一下浓度，3：1连接。...

好详细，多谢哈。
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7楼2014-02-28 20:40:35
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