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bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] HPLC问题求助高手已有3人参与

2000年购买的Bio-Rad 公司的Biologic DuoFlow Chromatography System,一直用于分析蛋白质(凝胶色谱及离子交换色谱)。最近3-4年没有人使用了,一直闲置。现在想用于反相HPLC分析,所以新买了C18色谱柱,但还没有连接上C18色谱柱。准备先试验一下系统是否还工作。遇到了麻烦。

流动相A: 0.1% TFA/水;流动相B: 0.1% 乙腈。使用前,2个流动相溶液都分别用超声波清洗器做15分钟脱气处理。

开始试验系统。流动相:A 90%, B 10%,走3分钟;然后A从 90%到0%, B从 10%到100%,走25分钟。

可以看到,没有连接色谱柱的情况下,色谱图出现很多峰,特别是在走梯度的时候。如果单纯走水,没有这些峰。

水占90%的时候,峰也很少。好像是每间隔2分钟,就出1个峰。是气泡峰吗?还是以前管线里面沉积的蛋白残留物?

本人没有操作过HPLC,是新手,身边没有人请教。现请教小木虫上都专家和高手,怎么解决?万分感谢!
HPLC问题求助高手
HPLC-BioLogic DuoFlow.PNG
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yanyunguang

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


bobcanada: 金币+1 2014-02-20 03:35:15
1请问用的是新的保护柱吗?2你的检测器可能受到污染3换根柱子试试了吗
每天都要进步
36楼2014-02-19 13:38:21
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