24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

菜菜0929

木虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 2128.3
帖子: 256
在线: 98.7小时
虫号: 2261978

[交流] 急！！求助primer5使用问题

请问1、输入primer5的序列必须是5‘到3’还是3‘到5’？
2、设计引物时，*G的要求是什么？

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有260人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

primer5.0下载使用~ 已经有307人回复
急求primer5注册机已经有5人回复
PCR引物设计具体是怎么回事求详细讲一下已经有12人回复
急！基因用PRIMER5翻译出来为什么和密码子不符？已经有4人回复
关于takata公司的5‘RACE试剂盒中的引物设计已经有13人回复
primer 5 和primer 6 的TM差异为何如此大已经有12人回复
primer 5 设计引物的问题已经有16人回复
利用Primer 5设计引物问题已经有6人回复
各位大虾，谁有关于从分子角度研究zn、p、cu胁迫的文章啊？已经有5人回复
primer5能输入多序列么？已经有6人回复
【求助/交流】引物合成及 Primer-BLAST问题已经有8人回复
【求助/交流】求大型多元统计软件Primer 5.0，及其教程已经有15人回复
【求助/交流】请问一下，informax，DNAStar,Primer Premier5.0这些软件怎么用，谢谢啊已经有5人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:
查看全部散金贴

1楼2014-01-17 18:16:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

寂寞又美好

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 871.5
帖子: 102
在线: 63.3小时
虫号: 2063846

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-01-21 09:29:39

一般从NCBI中下载得到的序列都是5‘到3’的，直接输入到Primer里面就行了，关于primer5设计引物，荧光引物和普通引物还是有很大的差别的，荧光引物最好所有的评分都是100,这样一般送一对合成足以，如果是普通引物要求就可以放松了，首先考虑的是错配，当然如果错配发生在非扩增区域就不用管，然后看自身二聚体，交叉二聚体，像这种ΔG的绝对值最好小于4.5左右，当然万一不行也可以放大，一般来讲，所有的参数ΔG控制在10以内。有时候引物设计出来即使是评分是100效果也不一定很好，因为如果你看一下Report选项中的Internal stability 就会发先你的上游或者下游引物的能量曲线可能有一个不是正弦曲线，一个好的引物不仅要从评分来看，还要从能势上考虑，理想的引物其能势呈正弦曲线，能势越高退火时越容易和模板结合，因此好的引物5‘端能势相对较高，3’端相对来说较低。