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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于甘油冷冻保藏菌种的问题
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zjm104273

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于甘油冷冻保藏菌种的问题 已有7人参与

请教各位大侠关于菌株用甘油冷冻保存（-80℃）的几个问题：
1、查网上资料发现甘油终浓度从10%-40%不等，到底哪个浓度最合适，还是说都可以？
2、放线菌和霉菌需制备孢子悬浮液，请问孢子悬浮液是用无菌水还是生理盐水或者缓冲液？放线菌的孢子如何制备？斜面培养后刮取过滤么？如果里面菌丝体存在，对保藏是否有很大影响？
3、混悬好的冻存管是直接放入-80℃冰箱么？不是需要慢冻么？
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1楼 2014-01-10 15:01:13
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

J_iee

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjm104273: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-01-13 14:55:52
一般20%即可。
等菌体长满整个培养皿时，用生理盐水洗涤静置个几分钟，然后生理盐水与甘油1：1混合。不用慢冻，直接放进-80冰箱。两三年是没有问题的
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6楼2014-01-12 14:54:09
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棘白菌素

铜虫 (正式写手)
细菌细胞小 可以采用低浓度的甘油保护液，而霉菌和放线菌，如果有菌丝在里面，建议加大甘油浓度，否则会沉降到底部，保护效果一般，如果是孢子液浓度稍微低些问题也不大，但孢子液最好用生理盐水制备较好。
保种没有死规定，只有效果好与坏；不过菌种比较脆弱或不稳定时，建议操作小心一点，慢冻快溶是基本的原则吧，尤其是低浓度甘油，真心不建议直接放入-80度。
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青春留不住，白发自然生！
13楼2014-12-25 11:15:51
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普通回帖

小馒头66651

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般实验室用的都是40%的甘油进行保藏，可以保藏一个月到两个月的时间。
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2楼2014-01-10 15:48:12
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平原草木

金虫 (初入文坛)
帮顶

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-01-11 06:59:14
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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一般保藏菌种用20-25%的甘油保藏即可，放线菌或霉菌直接用20-25%的甘油洗下孢子制备成孢子悬液分装冻存管，直接放入零下80度低温冰箱保藏，可以保藏2-3年。
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4楼2014-01-11 09:03:32
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naipingzai

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室用的50%甘油，细菌和甘油比例是3:7，可以放很多年
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怀揣一颗向往远方的心，奈何困在实验室的樊笼
5楼2014-01-12 10:56:37
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们用25%的甘油保存，三四年了菌一样用。
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hehe
7楼2014-01-12 20:33:11
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青铜时代

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
各个实验室习惯不同，个人观点10%-40%都可以，甘油浓度越高，从冰箱取出后融化得约快。
一般直接放-80冻就ok了，不用像冻细胞那样慢冻。
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8楼2014-01-13 01:01:28
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjm104273: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-01-13 14:55:38
20%甘油终浓度
孢子悬浮液是用用生理盐水
直接放入-80℃冰箱
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工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
9楼2014-01-13 09:58:49
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vivit1986

铁虫 (初入文坛)
个人觉得甘油的浓度看自己，我也查过，众说纷纭，10%-40%都可以，换句话说，你配的甘油浓度就那么准，肯定不可能，所以在一定范围内就可以了，另外紫外线的杀菌主要是对物体表面，而要彻底灭菌，高压蒸汽灭菌效果最好！
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10楼2014-01-23 11:01:11
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