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zjm104273

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于甘油冷冻保藏菌种的问题 已有7人参与

请教各位大侠关于菌株用甘油冷冻保存(-80℃)的几个问题:
1、查网上资料发现甘油终浓度从10%-40%不等,到底哪个浓度最合适,还是说都可以?
2、放线菌和霉菌需制备孢子悬浮液,请问孢子悬浮液是用无菌水还是生理盐水或者缓冲液?放线菌的孢子如何制备?斜面培养后刮取过滤么?如果里面菌丝体存在,对保藏是否有很大影响?
3、混悬好的冻存管是直接放入-80℃冰箱么?不是需要慢冻么?
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J_iee

新虫 (初入文坛)

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★ ★
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zjm104273: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-01-13 14:55:52
一般20%即可。
等菌体长满整个培养皿时,用生理盐水洗涤静置个几分钟,然后生理盐水与甘油1:1混合。不用慢冻,直接放进-80冰箱。两三年是没有问题的
6楼2014-01-12 14:54:09
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棘白菌素

铜虫 (正式写手)

细菌细胞小 可以采用低浓度的甘油保护液,而霉菌和放线菌,如果有菌丝在里面,建议加大甘油浓度,否则会沉降到底部,保护效果一般,如果是孢子液浓度稍微低些问题也不大,但孢子液最好用生理盐水制备较好。
保种没有死规定,只有效果好与坏;不过菌种比较脆弱或不稳定时,建议操作小心一点,慢冻快溶是基本的原则吧,尤其是低浓度甘油,真心不建议直接放入-80度。
青春留不住,白发自然生!
13楼2014-12-25 11:15:51
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普通回帖

小馒头66651

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般实验室用的都是40%的甘油进行保藏,可以保藏一个月到两个月的时间。
2楼2014-01-10 15:48:12
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平原草木

金虫 (初入文坛)

帮顶

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-01-11 06:59:14
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般保藏菌种用20-25%的甘油保藏即可,放线菌或霉菌直接用20-25%的甘油洗下孢子制备成孢子悬液分装冻存管,直接放入零下80度低温冰箱保藏,可以保藏2-3年。
4楼2014-01-11 09:03:32
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naipingzai

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们实验室用的50%甘油,细菌和甘油比例是3:7,可以放很多年
怀揣一颗向往远方的心,奈何困在实验室的樊笼
5楼2014-01-12 10:56:37
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们用25%的甘油保存,三四年了菌一样用。
hehe
7楼2014-01-12 20:33:11
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青铜时代

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
各个实验室习惯不同,个人观点10%-40%都可以,甘油浓度越高,从冰箱取出后融化得约快。
一般直接放-80冻就ok了,不用像冻细胞那样慢冻。
8楼2014-01-13 01:01:28
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zjm104273: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-01-13 14:55:38
20%甘油终浓度
孢子悬浮液是用用生理盐水
直接放入-80℃冰箱
工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
9楼2014-01-13 09:58:49
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vivit1986

铁虫 (初入文坛)

个人觉得甘油的浓度看自己,我也查过,众说纷纭,10%-40%都可以,换句话说,你配的甘油浓度就那么准,肯定不可能,所以在一定范围内就可以了,另外紫外线的杀菌主要是对物体表面,而要彻底灭菌,高压蒸汽灭菌效果最好!
10楼2014-01-23 11:01:11
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