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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教微生物菌种保藏低温保护剂的有关问题
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Jakin_Lau

木虫 (小有名气)

[交流] 请教微生物菌种保藏低温保护剂的有关问题

最近看外文资料有关微生物低温保护剂的，只是在有关文献有看到，，但是为什么选择那样的低温保护剂或者是哪一类的低温保护剂，原理等还是摸不清头脑，，这里是否有大虾在这个方面有了解的，或者有这方面书籍资料的，就出来冒泡救救这位小虾！！邮箱：Yanqiaoli321@126.com
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1楼 2012-12-03 16:10:22
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panghuili

金虫 (小有名气)
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laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流 2012-12-04 10:03:54
一般的德文保护剂能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性，比如二甲基亚砜。
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2楼2012-12-04 09:25:19
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Jakin_Lau

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by panghuili at 2012-12-04 09:25:19
一般的德文保护剂能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性，比如二甲基亚砜。

谢谢，，，我想请问您在这方面有比较详细的书本资料介绍没？我看到很多文献基本分析也是这样，，但是低温保护剂那么多，，怎么去确定一个大概的浓度或者是哪一类保护等等问题要怎么解决还是个问题
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3楼2012-12-04 11:12:49
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)
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rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-12-06 16:37:49
10%的牛奶，20-25%甘油，
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4楼2012-12-06 13:05:28
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panghuili

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
呵呵 可以用nutrite agar液体培养基加上10%二甲基亚砜即可 -80℃超低温冻存
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5楼2012-12-13 20:02:17
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dodge1984

铁虫 (小有名气)
★
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微生物的冷冻干燥保存所用的保护剂
①酸性物质
天门冬氨酸、谷氨酸、苹果酸、乳酸
②中性物质
葡萄糖、乳糖、蔗糖、棉籽糖、海藻糖、山梨醇、DL2苏氨酸、肌醇、木糖醇
③碱性物质
精氨酸、组氨酸
④高分子物质及其分解产物
白蛋白、动物胶、粘液蛋白、各种胨、肉汁、酵母汁、可溶性淀粉、糊精、海藻酸、果胶、阿拉伯胶、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 、羧甲基纤维素(CMC) 、藻类
⑤天然的混合物
脱脂乳、血清、脱纤维蛋白血液
⑥其它
抗坏血酸、半胱氨酸、羟胺、胺基脲

（1）甘油：具有良好渗透性的小分子化合物保护剂，能渗透至细胞内部，以羟基和胞内大分子形成氢键，部分取代由水分子形成的氢键，使生物体内的蛋白质、碳水化合物、脂肪和其它大分子物质在缺水条件下仍可保持其原有结构，维持生物体活力。但甘油浓度过高易造成样品发粘，不易干燥。甘油所具有的羟基可与细胞表面自由基联结，避免菌体暴露在介质中，还可与蛋白质形成氢键取代水，保证蛋白质稳定性。甘油有很强持水性，可使细胞在干燥过程中水分不至于下降太快，破坏细胞蛋白质结构而使菌体受损。但甘油浓度提高至一定程度时，对蛋白质稳定作用能力可能达到了极限，过高浓度会使冷冻干燥过程中蛋白质发生变质。冷冻时加入甘油后将发生如下变化: ①冲淡溶液中溶质(盐) 浓度,细胞摄入盐量减少,由保护剂替代; ②保护剂进入细胞,改变了胞内过冷状态,使胞内压力接近胞外压力,降低了细胞脱水皱缩程度和速度; ③保护剂进出细胞容易,缓解了复水时渗透性肿胀引起的损伤。2%，5%，10%，无菌水对照，每种浓度做一组平行取平均值。

（2）蔗糖：非还原性低聚糖，既能起低温保护剂的功能，又能在干燥脱水过程中起脱水保护剂作用。糖生物保护作用机理有“水替代假说”和“玻璃态假说”。 在干燥过程中蔗糖形成一种玻璃态,在玻璃态下粘度极高,因而分子扩散系数很低,使大分子物质的链锻运动受阻,细胞壁的通透性降低,从而起到保护作用。生物活性保护剂要有较高的玻璃态温度，或有一定的羟基代替水，使蛋白质保持较低的主相变温度。如工作温度低于保护剂的玻璃化温度，高于被保护的活性物质的主相变温度，该活性物质就能有效保持活性。蔗糖在溶液中易结合水分子，发生水合作用，从而减缓晶核的生长过程，使形成的冰晶较细小，达到保护细胞的目的。蔗糖浓度过高，会使冻结时细胞间歇内的液体逐渐浓缩，从而使电解质的浓度显著增加，产生溶质损伤效应，导致细胞脱水死亡。5%，10%,15%,20%，无菌水对照，每种浓度做一组平行取平均值。

（3）脱脂奶粉：常见的高分子保护剂，溶于水后使溶液呈过冷状态，在冰点以下的相同温度该溶液中的溶质浓度较小，蛋白质盐析变形较小。脱脂奶粉能减少细胞暴露于氧气和介质中的面积，同时在菌体表面形成保护层，减少由于细胞壁损坏而引起的胞内物质泄漏而起保护作用。干燥时，奶粉中的乳清蛋白能在菌体外形成蛋白膜，对细胞加以保护，并可固定冻干酶类，防止由于细胞壁蛋白质损坏而引起的胞内物质泄漏,而且乳中其它成分(如乳糖等) 同样可提高菌体的冻干存活率。脱脂奶粉主要在细胞表面起保护层作用。奶粉中其它成分也可以提高菌体冻干存活率。当脱脂奶粉浓度过高时，菌体表面完全被保护剂覆盖，奶粉中的乳糖会对细胞造成损伤使冻干存活率下降。5%，10%，15%，无菌水对照，每种浓度做一组平行取平均值。

（4）聚合物类：简单小分子经过聚合反应后，形成的巨大分子。聚合物类保护剂的性质：聚合物在冻结过程中优先析出；具有一定的表面活性；提高溶液粘度；显著提高玻璃化转变温度；抑制溶液pH的降低。可以起低温保护剂和脱水保护剂作用。β-环状糊精是一种大分子多糖，具有环状孔洞分子结构，一般为食品添加剂，广泛用于固体饮料制造，既能阻止细胞在干燥时的收缩变硬，提高其外观品质，又能提高产品复水率。5%，10%，15%，20%，无菌水对照，每种浓度做一组平行取平均值。

（5）L-半胱氨酸盐酸盐：抗氧化剂，在冷冻干燥和储藏过程中，细胞内蛋白质可能与空气中的氧发生氧化作用，引起变质，常在冻干样品配方中添加适量抗氧化剂提高稳定性。5%，10%，15%，20%，无菌水对照，每种浓度做一组平行取平均值。

（6）吐温-80：表面活性剂既能在冻结和脱水过程中降低冰-水界面张力所引起的冻结和脱水变性，又能在复水过程中对表面活性剂组分起到润湿剂和重褶皱剂的作用，为常用的非离
子型表面活性剂。5%，10%，15%，20%，无菌水对照，每种浓度做一组平行取平均值。

（7）海藻糖：海藻糖具有特殊的水合作用, 在冷冻干燥生物制品方面具有广阔的应用前景。具有稳定细胞膜和蛋白质结构、抗逆保鲜的作用,在生物保藏方面有着其它保护剂不可比拟的优势,但目前国内尚未工业化大规模生产海藻糖,成本较高。
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8楼2013-02-03 15:40:08
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su-b086楼
2012-12-13 21:44   回复  
su-b087楼
2012-12-15 19:16   回复  
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