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LYSH1103

新虫 (初入文坛)

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[求助] 植物gDNA为模板，PCR前几次出现清晰条带，后面出现涂抹型条带是什么原因？已有5人参与

我是PCR后进行测序，第一副图是之前的PCR，第二份图是P不出来的图。最后的图片是DNA的质量。体系时50微升的。同KOD酶和普通Taq都是出现相同的现象。求各位指点。

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植物gDNA为模板，PCR前几次出现清晰条带，后面出现涂抹型条带是什么原因？-1

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植物gDNA为模板，PCR前几次出现清晰条带，后面出现涂抹型条带是什么原因？-2

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1楼 2014-01-08 23:12:56

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LYSH1103

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引用回帖:

6楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-09 12:24:13
因为样品里有RNA和其它杂质，可能需要适当增加镁离子浓度或者降低退火温度。...

我在提取DNA的时候已经用过RNase A .其他杂质这个就。。。难弄啦。。。。我用的是降落式PCR程序，55-65度，还要再低点吗？出现问题后我也试过45-55度和50-60度。酶有结果啊。镁离子这个我倒是没有提高。因为我觉得体系没有问题。之前很好啊。对了，我也怀疑过DNA质量，我也新提取了DNA，还是一个样子。。。