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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 对HPLC使用注意事项的一点疑惑
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fluffylee

铜虫 (小有名气)

[交流] 对HPLC使用注意事项的一点疑惑 已有8人参与

刚才在网上看到这样一段话：

HPLC使用注意事项
1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜  过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

请问大家在跑hplc之前都会过滤吗？可是溶剂本身就是HPLC grade而且过滤的那个管子也不一定干净万一更多颗粒杂质进去怎么办···
还有就是第三条，不能用纯乙腈作为流动相，也就是说就算是跑梯度，也不能出现100%乙腈？那为什么最后清洗柱子的时候可以用100%乙腈？

贴上来大家讨论一下~~
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1楼 2014-01-08 14:35:38
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 小猫呢呢 at 2014-01-08 14:52:33
我们实验室用的是莫克的流动相，没有过滤，但如果你要用的流动相含有盐离子，最好过滤。
有的实验室购买的液相本身就有在线脱气装置，可以不脱气。但还是建议先脱气，延长仪器使用寿命。
最好不要用100%乙腈冲洗柱 ...

非常感谢！你说的脱气就是purge吧？
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3楼2014-01-08 14:58:21
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jsys at 2014-01-08 15:52:14
色谱纯的乙腈或甲醇不用过滤，出厂的时候已经过滤的很好的，可以超声后直接使用。
纯水如果是娃哈哈纯净水（小瓶装）可超生直接使用，其它你不清楚的品牌最好过滤超声后使用。
纯乙腈 可以直接作流动相，并切作为 ...

谢谢斑竹！
我们实验室用的水是millipore，溶剂是fisher的。
我看Agilent给的使用小册子也说柱子保存在100%甲醇或者乙腈里，所以我原po的第三条说得对吗？
再次感谢！
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8楼2014-01-09 01:09:48
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by songyuze0319 at 2014-01-08 15:57:03
怎么字成了那几个，我说的是：脱气一般是指超声脱气，purge是赶气泡。

哈哈~谢谢！话说 ls之前提到的在线脱气 是指prime吗？Agilent chemstation里pump的prime功能，一直不知道什么用处···

[ Last edited by fluffylee on 2014-1-9 at 01:17 ]
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9楼2014-01-09 01:15:00
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yyall at 2014-01-08 16:07:14
这边用的即使是色谱级的也都过滤了。并且水之前用过哇哈哈的，也经过过滤。
色谱级的没过滤的也用过。具体影响还没发现。不过有的试剂买回来的时候，会发现里面有可见异物。所以这边即使看不见可见异物，都会过滤。 ...

了解了~~感谢！
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10楼2014-01-09 01:17:14
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by songyuze0319 at 2014-01-08 15:57:03
怎么字成了那几个，我说的是：脱气一般是指超声脱气，purge是赶气泡。

我想起来了 我们lab的Agilent1290是有degasser的，那个应该就是ls所说的在线脱气
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11楼2014-01-09 01:33:23
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by jct111111 at 2014-01-09 09:01:14
1.为了保证实验结果干扰少和仪器的是用寿命最好使用HPLC级的试剂，过滤的话主要是针对水相来说的尤其是使用缓冲盐的时候。
2、超声波脱气势离线脱气的一种，主要目的是去除溶解在溶剂中的气体，防止溶剂混合的时候 ...

说得很清楚，感谢！
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13楼2014-01-09 12:58:52
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by da1234mao at 2014-01-10 20:47:33
第一我一般做UPLC都不过滤，第二条，分析型的有自己的脱气装置，我没有超声过，第三是错的！

谢谢回复，第三条引用LS回复是这样的：
3、只是建议客户不要长期使用100%乙腈做为流动相，因为乙腈在高压条件下，粘度变大，导致单向阀运转发生问题，从而对实验结果造成影响。

应该说原PO没说清楚~
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15楼2014-01-11 05:48:21
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by shen2003 at 2014-01-11 07:01:48
乙腈堵单向阀是很常见，但是不能因噎废食，走梯度比例一般没事，进口色谱试剂过了0.2微米滤膜，还过滤什么啊，重新引入杂志，

嗯 我也这么觉得 过滤的管子啊仪器啊什么的都不知道干不干净···
主要是之前lab有个女生去学校的analytical lab做实验，然后说那儿管事儿的什么溶剂都要过滤一遍才用···那哥们儿还挺牛的我就想上来问问到底需不需要过滤。。
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17楼2014-01-11 08:45:43
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 芬尼根 at 2014-02-11 23:18:44
盐溶液都要过滤的，确实洗不干净可能引进杂质，但你自己洗干净就好，纯乙腈会聚合，堵住管路或者柱子的，不要用。

谢谢！
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19楼2014-02-14 10:24:33
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