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fluffylee

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于HPLC使用结束C18柱子的清洗 已有1人参与

实验室有台Agilent 1290 UPLC,用的是二元液相泵。A1(1%醋酸:99%水,v/v)和B1(50%甲醇:50%乙腈:v/v)里的流动相是用来测橄榄/橄榄油中多酚物质的,A2和B2也是固定经常测橄榄/橄榄油里别的物质的。
每次测完多酚,都会用B1流动相无梯度洗脱1小时,不知道这样可以吗?看了些资料说柱子最好保存在100%甲醇里因为甲醇抗菌效果比乙腈好?还有就是一般使用完毕柱子清洗是不是用这个梯度的比较多:10%甲醇水溶液1h-50%甲醇水溶液1h-100%甲醇水溶液1h,流速0.2ml/min合适吗?
我的问题是我一般很多样品,每个样品要跑1h,一般我都是白天做好一个list,让它跑着晚上它就自动关了。这种情况下,我是不是每次都需要把A2/B2的溶液换掉换成A2(水)/B2(甲醇)最后清洗一遍我的柱子?还是用B1这个混合溶液0.2mL/min洗1h就ok(而且我一般最后洗两遍,就是2h)?
谢谢大家啦!
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yyall

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fluffylee: 金币+1, 谢谢! 2014-01-08 14:06:11
suruiqin: 金币+2, 感谢交流,欢迎常来分析版~ 2014-01-09 13:35:10
低浓度甲醇水冲洗,甲醇保护。或者直接甲醇水低流速过夜。
做最仔细的分析工作,用细致甚微弥补学历不足
2楼2014-01-08 13:54:12
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fluffylee

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yyall at 2014-01-08 13:54:12
低浓度甲醇水冲洗,甲醇保护。或者直接甲醇水低流速过夜。

谢谢!那请问我的B1流动相可以吗?不然我只能每次都把A1/B1换来换去了。。
3楼2014-01-08 14:05:49
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yyall

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fluffylee at 2014-01-08 14:05:49
谢谢!那请问我的B1流动相可以吗?不然我只能每次都把A1/B1换来换去了。。...

你用的B1应该可以的。比例有点高,会不会浪费?但是不能保护柱子用。
做最仔细的分析工作,用细致甚微弥补学历不足
4楼2014-01-08 16:00:29
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fluffylee

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yyall at 2014-01-08 16:00:29
你用的B1应该可以的。比例有点高,会不会浪费?但是不能保护柱子用。...

那我以后还是把A2和B2换成水和甲醇好了···这样每次跑完我的sample在list最后加个wash method 跑个梯度最后让柱子保存在100%甲醇里好了 ,这样就没问题了吧
还有个疑问哈~你每次换流动相的时候,比如要把B2的5%甲醇水溶液换成100%水,你是直接先把filter放在一小杯水里浸泡一会儿,然后把filter放进要用的B2水中,还是什么别的方法?我知道如果前后溶剂不相溶的话需要用100%异丙醇过渡,但是如果相溶直接放进下一种溶剂不是污染了么。。不知道你们用什么方法?
谢谢!
5楼2014-01-09 01:23:52
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yyall

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by fluffylee at 2014-01-09 01:23:52
那我以后还是把A2和B2换成水和甲醇好了···这样每次跑完我的sample在list最后加个wash method 跑个梯度最后让柱子保存在100%甲醇里好了 ,这样就没问题了吧
还有个疑问哈~你每次换流动相的时候,比如要把B2的 ...

正确方式是把过滤器放在后面用的流动相里浸泡并清洗一下。这样不至于后面所用的流动相污染。并且操作比较严格。时间久了,过滤器要定时清洗。
做最仔细的分析工作,用细致甚微弥补学历不足
6楼2014-01-09 09:27:15
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fluffylee

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yyall at 2014-01-09 09:27:15
正确方式是把过滤器放在后面用的流动相里浸泡并清洗一下。这样不至于后面所用的流动相污染。并且操作比较严格。时间久了,过滤器要定时清洗。...

可是如果直接放进去,比如前一个流动相是带1%醋酸的,后一个是纯水,那不是之后的纯水也会有醋酸了吗?
7楼2014-01-09 12:57:17
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yyall

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by fluffylee at 2014-01-09 12:57:17
可是如果直接放进去,比如前一个流动相是带1%醋酸的,后一个是纯水,那不是之后的纯水也会有醋酸了吗?...

是的。所以要用下一步用的流动相冲洗一下。
做最仔细的分析工作,用细致甚微弥补学历不足
8楼2014-01-09 22:29:54
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fluffylee

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yyall at 2014-01-09 22:29:54
是的。所以要用下一步用的流动相冲洗一下。...

嗯,好的~非常感谢
9楼2014-01-10 02:01:21
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