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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » waters C18柱子压力上升降不下来
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liyan20220

木虫 (著名写手)

[求助] waters C18柱子压力上升降不下来

蛋白样品400ul+400ulHFIP+200ul甲酸溶解后离心上样，bufferA为100%水+0.1%TFA，bufferB为100%乙腈+0.1TFA，上样三四次后，柱子压力逐步升高，我用的是waters的C18柱子，用水—异丙醇-甲醇-水，梯度冲洗，bufferA为100%水+0.1%TFA，bufferB为100%乙腈+0.1TFA，梯度冲洗，压力都没有降下来，怎么办能使压力不上升呢？不接柱子压力很小，应该就是柱子的原因
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1楼 2013-04-11 21:08:48
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kkbyb

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
反冲，正着冲越冲越不好处理
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2楼2013-04-11 23:27:39
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akosrios

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做蛋白最好用保护柱，应该是筛板有些堵，去下超声一下
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中华人民共和国公民有言论、出版、集会、结社、游行、示威的自由。---中国人民共和国宪法二章三十五条
3楼2013-04-12 08:06:53
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swallow13

禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来！ 2013-04-12 14:35:30
本帖内容被屏蔽
4楼2013-04-12 10:55:39
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by swallow13 at 2013-04-12 10:55:39
不同意一楼的观点 反冲绝对不是首选的方法 建议选择更强的溶剂 如DMSO或者DMF来冲洗 另外 之前有位坛友也遇到过蛋白堵柱子的问题 他是用蛋白酶来冲洗柱子 压力降下来了 供lz参考

蛋白酶是冲洗蛋白样品堵塞的好办法
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5楼2013-04-12 14:27:56
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liyan20220

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liu2011 at 2013-04-12 14:27:56
蛋白酶是冲洗蛋白样品堵塞的好办法...

用什么蛋白酶啊，我的融合蛋白是MBP。担心是融合蛋白没有洗下来
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6楼2013-04-16 22:08:17
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swt1898

铁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这样要加强样品的前处理，不然柱子费的快，银子花花的
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7楼2013-04-17 09:39:27
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by liyan20220 at 2013-04-16 22:08:17
用什么蛋白酶啊，我的融合蛋白是MBP。担心是融合蛋白没有洗下来...

你去买，就买你这个MBP的溶解酶，只要知道什么堵了，剩下的事情很好做的，
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8楼2013-04-17 11:57:46
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liyan20220

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liu2011 at 2013-04-17 11:57:46
你去买，就买你这个MBP的溶解酶，只要知道什么堵了，剩下的事情很好做的，...

具体怎么用溶解酶做啊？先把柱子用水洗，然后注入样品环里再注进柱子吗
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9楼2013-04-18 16:33:38
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by liyan20220 at 2013-04-18 16:33:38
具体怎么用溶解酶做啊？先把柱子用水洗，然后注入样品环里再注进柱子吗...

你直接配置后冲洗柱子
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10楼2013-04-22 12:50:26
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