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liyan20220

木虫 (著名写手)

[求助] waters C18柱子压力上升降不下来

蛋白样品400ul+400ulHFIP+200ul甲酸溶解后离心上样,bufferA为100%水+0.1%TFA,bufferB为100%乙腈+0.1TFA,上样三四次后,柱子压力逐步升高,我用的是waters的C18柱子,用水—异丙醇-甲醇-水,梯度冲洗,bufferA为100%水+0.1%TFA,bufferB为100%乙腈+0.1TFA,梯度冲洗,压力都没有降下来,怎么办能使压力不上升呢?不接柱子压力很小,应该就是柱子的原因
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kkbyb

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
反冲,正着冲越冲越不好处理
2楼2013-04-11 23:27:39
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akosrios

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做蛋白最好用保护柱,应该是筛板有些堵,去下超声一下
中华人民共和国公民有言论、出版、集会、结社、游行、示威的自由。---中国人民共和国宪法二章三十五条
3楼2013-04-12 08:06:53
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swallow13

禁虫 (正式写手)


感谢参与,应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢应助,欢迎常来! 2013-04-12 14:35:30
本帖内容被屏蔽

4楼2013-04-12 10:55:39
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by swallow13 at 2013-04-12 10:55:39
不同意一楼的观点 反冲绝对不是首选的方法 建议选择更强的溶剂 如DMSO或者DMF来冲洗 另外 之前有位坛友也遇到过蛋白堵柱子的问题 他是用蛋白酶来冲洗柱子 压力降下来了 供lz参考

蛋白酶是冲洗蛋白样品堵塞的好办法
5楼2013-04-12 14:27:56
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liyan20220

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liu2011 at 2013-04-12 14:27:56
蛋白酶是冲洗蛋白样品堵塞的好办法...

用什么蛋白酶啊,我的融合蛋白是MBP。担心是融合蛋白没有洗下来
6楼2013-04-16 22:08:17
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swt1898

铁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这样要加强样品的前处理,不然柱子费的快,银子花花的
7楼2013-04-17 09:39:27
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by liyan20220 at 2013-04-16 22:08:17
用什么蛋白酶啊,我的融合蛋白是MBP。担心是融合蛋白没有洗下来...

你去买,就买你这个MBP的溶解酶,只要知道什么堵了,剩下的事情很好做的,
8楼2013-04-17 11:57:46
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liyan20220

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by liu2011 at 2013-04-17 11:57:46
你去买,就买你这个MBP的溶解酶,只要知道什么堵了,剩下的事情很好做的,...

具体怎么用溶解酶做啊?先把柱子用水洗,然后注入样品环里再注进柱子吗
9楼2013-04-18 16:33:38
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by liyan20220 at 2013-04-18 16:33:38
具体怎么用溶解酶做啊?先把柱子用水洗,然后注入样品环里再注进柱子吗...

你直接配置后冲洗柱子
10楼2013-04-22 12:50:26
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