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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 关于HPLC使用结束C18柱子的清洗
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fluffylee

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于HPLC使用结束C18柱子的清洗已有1人参与

实验室有台Agilent 1290 UPLC，用的是二元液相泵。A1（1%醋酸：99%水，v/v）和B1（50%甲醇：50%乙腈：v/v）里的流动相是用来测橄榄/橄榄油中多酚物质的，A2和B2也是固定经常测橄榄/橄榄油里别的物质的。
每次测完多酚，都会用B1流动相无梯度洗脱1小时，不知道这样可以吗？看了些资料说柱子最好保存在100%甲醇里因为甲醇抗菌效果比乙腈好？还有就是一般使用完毕柱子清洗是不是用这个梯度的比较多：10%甲醇水溶液1h-50%甲醇水溶液1h-100%甲醇水溶液1h，流速0.2ml/min合适吗？
我的问题是我一般很多样品，每个样品要跑1h，一般我都是白天做好一个list，让它跑着晚上它就自动关了。这种情况下，我是不是每次都需要把A2/B2的溶液换掉换成A2（水）/B2（甲醇）最后清洗一遍我的柱子？还是用B1这个混合溶液0.2mL/min洗1h就ok（而且我一般最后洗两遍，就是2h）？
谢谢大家啦！
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1楼2014-01-08 13:47:38
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyall at 2014-01-08 13:54:12
低浓度甲醇水冲洗，甲醇保护。或者直接甲醇水低流速过夜。

谢谢！那请问我的B1流动相可以吗？不然我只能每次都把A1/B1换来换去了。。
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3楼2014-01-08 14:05:49
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yyall at 2014-01-08 16:00:29
你用的B1应该可以的。比例有点高，会不会浪费？但是不能保护柱子用。...

那我以后还是把A2和B2换成水和甲醇好了···这样每次跑完我的sample在list最后加个wash method 跑个梯度最后让柱子保存在100%甲醇里好了 ，这样就没问题了吧
还有个疑问哈~你每次换流动相的时候，比如要把B2的5%甲醇水溶液换成100%水，你是直接先把filter放在一小杯水里浸泡一会儿，然后把filter放进要用的B2水中，还是什么别的方法？我知道如果前后溶剂不相溶的话需要用100%异丙醇过渡，但是如果相溶直接放进下一种溶剂不是污染了么。。不知道你们用什么方法？
谢谢！
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5楼2014-01-09 01:23:52
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yyall at 2014-01-09 09:27:15
正确方式是把过滤器放在后面用的流动相里浸泡并清洗一下。这样不至于后面所用的流动相污染。并且操作比较严格。时间久了，过滤器要定时清洗。...

可是如果直接放进去，比如前一个流动相是带1%醋酸的，后一个是纯水，那不是之后的纯水也会有醋酸了吗？
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7楼2014-01-09 12:57:17
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fluffylee

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yyall at 2014-01-09 22:29:54
是的。所以要用下一步用的流动相冲洗一下。...

嗯，好的~非常感谢
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9楼2014-01-10 02:01:21
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