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2011sust木虫 (正式写手)
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实时PCR反应体系求助已有2人参与
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为什么有些反应体系中有MgCl2,dNTP等，有些却没有？PCR预混试剂是自己配制的还是需要购买呢？ 文献上配制反应母液时会加模板，这个模板指的是我样品总DNA吗？要先把样品总DNA稀释六个梯度，然后配制六个反应母液？还是加进去总DNA，配制了母液之后，然后再稀释六个梯度，六个梯度的反应液再加到六个反应孔中吗？ 我做相对定量，目的基因和内参基因要放到不同的反应孔吗？ 很多常识都不懂，菜鸟一个，还望好心人帮帮我了，谢谢了 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
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cicelyzh
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购买的试剂有些是做好的2 X mix，包括除去模板、引物外的所有需要成分，做反应时不要写自己另外加MgCl2和dNTP了。购买的试剂，有些公司是做了预混的2X，有些需要自己混。 你说的情况不是通常的定量，而是做标准曲线吧。只有在做标准曲线时才会稀释模板。通常做定量时要比较多对引物（包括内参）及多个样品（不同的处理或者突变株），做master mix时要做分级。第一级时混合好成分，不包括引物和模板。然后分成若干第二级mix，按照方便，在每个二级mix里加不同的引物对或者不同的模板，然后再把每个混好的二级mix分成若干管三级mix，加入不同的模板或者引物对（加入二级mix里没加的）。混好后再把三级mix分别加入指定的反应管或者plate的不同孔里。 |
2楼2013-12-29 02:57:58
lvbobo823
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