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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于细菌计数方法
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

[求助] 关于细菌计数方法 已有5人参与

我在做培养基的优化实验，一个批次有十五瓶，都要计算细菌数目，一开始我测定OD值来计数，以空白培养基为对照，但该培养基本身很浑浊，所以我觉得这个方法可能不太准确，然后用稀释涂板做过一次，一次涂板用了好几个小时，这样时间间隔带来的误差是不是也很大？另外，平板计数长出的菌落不同梯度间也不成比例，请问有没有其他较为简便且准确的细菌计数方法？
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www------sr-------------
1楼 2013-12-19 14:59:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
涂平板相对测OD确实要直观准确些，不过涂几个小时。。。这确实太久了，你直接稀释到10的8次方开始涂，然后每种做3组平行的，求平均值，这样你工作量也少了，也更精确些，而且涂平板的话确实不好看出梯度的，因为一块板上菌落多了，根本数不过来，而且还有重叠的，哪能看得出梯度啊，一般选择30-300个之间的板子计数！
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3楼2013-12-19 15:32:54
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zoeye

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用平板稀释法可以的，稀释到你可以数清菌落的个数

细胞计数器 九宫格数 先稀释
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2楼2013-12-19 15:26:01
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青铜时代

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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贤愚Libra: 金币+10, ★有帮助 2013-12-20 11:41:40
平板计数法计的是活菌数，OD值检测的死菌活菌都在内。要知道，过了对数生长期后，菌会出现不同程度的老化和死亡。
关于不同梯度间也不成比例的问题，比较常见，不排除：
1）梯度稀释时没有将菌充分涡旋分散；
2）涂布时，玻棒等会带走部分菌液，产生误差，这种误差在高稀释度管尤其明显。
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6楼2013-12-20 09:39:55
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青铜时代

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
贤愚Libra: 金币+5, 是啊 2013-12-24 08:12:39
呵呵，涂板技术在很多英文文献中常用time-consuming 或labor-consuming来形容的，兴师动众是少不了的，尤其待测组别多，菌株也多时。不过费事归费事，得出的结果还是比较可靠的，在抗菌药理学领域很多动态评价活性物的方法首推涂板技术法。
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12楼2013-12-23 11:38:17
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普通回帖

梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
呃，涂板确实挺费事儿的，熟练后就可以快点了。至于你说的误差，要看你这个菌的生长情况了，如果要长很多天，那就可以忽略几个小时。十五个样，快的话，2个小时内可以解决吧。
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轻描淡写，浓墨重彩。
4楼2013-12-19 18:35:26
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JNVBNC

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
贤愚Libra: 金币+5 2013-12-20 11:42:07
用微生物生长曲线测定仪 直接搞定

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-12-20 00:20:09
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-12-19 18:35:26
呃，涂板确实挺费事儿的，熟练后就可以快点了。至于你说的误差，要看你这个菌的生长情况了，如果要长很多天，那就可以忽略几个小时。十五个样，快的话，2个小时内可以解决吧。

生长24小时涂板，2小时我只能搞定二分之一啊。
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www------sr-------------
7楼2013-12-20 11:35:12
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by JNVBNC at 2013-12-20 00:20:09
用微生物生长曲线测定仪 直接搞定

木有这个东西啊
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www------sr-------------
8楼2013-12-20 11:36:18
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 青铜时代 at 2013-12-20 09:39:55
平板计数法计的是活菌数，OD值检测的死菌活菌都在内。要知道，过了对数生长期后，菌会出现不同程度的老化和死亡。
关于不同梯度间也不成比例的问题，比较常见，不排除：
1）梯度稀释时没有将菌充分涡旋分散；
2） ...

梯度稀释混匀的确太重要，我以前都不换枪头，以为觉得反正反复吸打后就不会造成影响了，看来还是不能自己凭空认为，另外，OD值检测死菌活菌都有，这个我以前真没想到这点，谢谢。
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www------sr-------------
9楼2013-12-20 11:39:29
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2013-12-19 15:32:54
涂平板相对测OD确实要直观准确些，不过涂几个小时。。。这确实太久了，你直接稀释到10的8次方开始涂，然后每种做3组平行的，求平均值，这样你工作量也少了，也更精确些，而且涂平板的话确实不好看出梯度的，因为一块 ...

我觉得涂几块板倒是不费事，主要是梯度稀释浪费时间且容易出问题。
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www------sr-------------
10楼2013-12-20 11:41:21
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