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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

[求助] 关于细菌计数方法 已有5人参与

我在做培养基的优化实验,一个批次有十五瓶,都要计算细菌数目,一开始我测定OD值来计数,以空白培养基为对照,但该培养基本身很浑浊,所以我觉得这个方法可能不太准确,然后用稀释涂板做过一次,一次涂板用了好几个小时,这样时间间隔带来的误差是不是也很大?另外,平板计数长出的菌落不同梯度间也不成比例,请问有没有其他较为简便且准确的细菌计数方法?
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原罪的祷告

金虫 (正式写手)

慧耘生物


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
涂平板相对测OD确实要直观准确些,不过涂几个小时。。。这确实太久了,你直接稀释到10的8次方开始涂,然后每种做3组平行的,求平均值,这样你工作量也少了,也更精确些,而且涂平板的话确实不好看出梯度的,因为一块板上菌落多了,根本数不过来,而且还有重叠的,哪能看得出梯度啊,一般选择30-300个之间的板子计数!
3楼2013-12-19 15:32:54
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zoeye

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用平板稀释法可以的,稀释到你可以数清菌落的个数

细胞计数器 九宫格数 先稀释
2楼2013-12-19 15:26:01
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青铜时代

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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贤愚Libra: 金币+10, 有帮助 2013-12-20 11:41:40
平板计数法计的是活菌数,OD值检测的死菌活菌都在内。要知道,过了对数生长期后,菌会出现不同程度的老化和死亡。
关于不同梯度间也不成比例的问题,比较常见,不排除:
1)梯度稀释时没有将菌充分涡旋分散;
2)涂布时,玻棒等会带走部分菌液,产生误差,这种误差在高稀释度管尤其明显。
6楼2013-12-20 09:39:55
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青铜时代

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
贤愚Libra: 金币+5, 是啊 2013-12-24 08:12:39
呵呵,涂板技术在很多英文文献中常用time-consuming 或labor-consuming来形容的,兴师动众是少不了的,尤其待测组别多,菌株也多时。不过费事归费事,得出的结果还是比较可靠的,在抗菌药理学领域很多动态评价活性物的方法首推涂板技术法。
12楼2013-12-23 11:38:17
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普通回帖

梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
呃,涂板确实挺费事儿的,熟练后就可以快点了。至于你说的误差,要看你这个菌的生长情况了,如果要长很多天,那就可以忽略几个小时。十五个样,快的话,2个小时内可以解决吧。
轻描淡写,浓墨重彩。
4楼2013-12-19 18:35:26
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JNVBNC

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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贤愚Libra: 金币+5 2013-12-20 11:42:07
用微生物生长曲线测定仪 直接搞定

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-12-20 00:20:09
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-12-19 18:35:26
呃,涂板确实挺费事儿的,熟练后就可以快点了。至于你说的误差,要看你这个菌的生长情况了,如果要长很多天,那就可以忽略几个小时。十五个样,快的话,2个小时内可以解决吧。

生长24小时涂板,2小时我只能搞定二分之一啊。
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7楼2013-12-20 11:35:12
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by JNVBNC at 2013-12-20 00:20:09
用微生物生长曲线测定仪 直接搞定

木有这个东西啊
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8楼2013-12-20 11:36:18
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 青铜时代 at 2013-12-20 09:39:55
平板计数法计的是活菌数,OD值检测的死菌活菌都在内。要知道,过了对数生长期后,菌会出现不同程度的老化和死亡。
关于不同梯度间也不成比例的问题,比较常见,不排除:
1)梯度稀释时没有将菌充分涡旋分散;
2) ...

梯度稀释混匀的确太重要,我以前都不换枪头,以为觉得反正反复吸打后就不会造成影响了,看来还是不能自己凭空认为,另外,OD值检测死菌活菌都有,这个我以前真没想到这点,谢谢。
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9楼2013-12-20 11:39:29
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原罪的祷告 at 2013-12-19 15:32:54
涂平板相对测OD确实要直观准确些,不过涂几个小时。。。这确实太久了,你直接稀释到10的8次方开始涂,然后每种做3组平行的,求平均值,这样你工作量也少了,也更精确些,而且涂平板的话确实不好看出梯度的,因为一块 ...

我觉得涂几块板倒是不费事,主要是梯度稀释浪费时间且容易出问题。
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10楼2013-12-20 11:41:21
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