应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 合成的引物直接退火形成粘性末端后连入载体
51/1返回列表
查看: 12569  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zb0806030

银虫 (小有名气)

[求助] 合成的引物直接退火形成粘性末端后连入载体 已有5人参与

求助：有没有虫友做过合成两段互补的引物直接退火形成粘性末端以后再连入载体的？
请问具体的方法是怎样的呢？都需要加什么东西退火，反应应该怎么设置条件？
谢谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
厚积薄发
1楼 2013-12-18 16:47:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zb0806030

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-19 20:46:05
不需要进行任何磷酸化，但你载体酶切后绝对不能去磷酸化，否则就都没有磷酸集团了

退火，可用PCR仪，也可以直接放开水里面煮5min，然后放室温随水冷却到室温...

那退火的时候只需要把两种引物1：1混合就行了吗？还要加什么缓冲液吗？谢谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
厚积薄发
7楼2013-12-21 23:21:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

wxf-er

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zb0806030(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2013-12-19 09:18:24
合成的引物5'端应该没有磷酸化吧，如果没有，那就有两种处理：1，先磷酸化，然后退火成双链；2，先退火形成双链，然后5’端磷酸化。两种处理都行。如果，5‘端有磷酸化，那退火后直接连接。
赞一下(1人) 回复此楼
自然
3楼2013-12-18 22:40:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zb0806030

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wxf-er at 2013-12-18 22:40:10
合成的引物5'端应该没有磷酸化吧，如果没有，那就有两种处理：1，先磷酸化，然后退火成双链；2，先退火形成双链，然后5’端磷酸化。两种处理都行。如果，5‘端有磷酸化，那退火后直接连接。

我的引物没有磷酸化，为什么要磷酸化，不磷酸化不行吗？
还有就是退火的时候怎么做，都需要加什么东西，怎么设置反应的参数？谢谢
赞一下 回复此楼
厚积薄发
4楼2013-12-19 19:55:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zb0806030: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-21 23:18:59
引用回帖:
4楼: Originally posted by zb0806030 at 2013-12-19 19:55:47
我的引物没有磷酸化，为什么要磷酸化，不磷酸化不行吗？
还有就是退火的时候怎么做，都需要加什么东西，怎么设置反应的参数？谢谢...

不需要进行任何磷酸化，但你载体酶切后绝对不能去磷酸化，否则就都没有磷酸基团了

退火，可用PCR仪，也可以直接放开水里面煮5min，然后放室温随水冷却到室温

[ Last edited by gyesang on 2013-12-22 at 01:25 ]
赞一下(1人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-12-19 20:46:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂院校信息 +4 CX 330 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:48 by ms629
[考研] 354求调剂 +6 Tyoumou 2026-03-18 9/450 2026-03-21 20:47 by lbsjt
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭