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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 多肽紫外检测波长的选择问题
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吴迪2011

银虫 (小有名气)

[交流] 多肽紫外检测波长的选择问题

想问一下大家，在做多肽的分离纯化过程中紫外检测选择的波长是多少？214nm还是280nm?原因是什么？
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1楼 2013-12-16 17:56:47
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wangkaikaifh

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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zybpxy: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2013-12-17 09:40:41
可以做个全波长扫描看以下的，有的用的是220nm 的，不同的多肽所选择的波长是不一样的。

波长扫描的原理就是在一个波长范围内，对样品进行测量，反映的是样品在不同波长下的吸光度值。操作时需设定测量方式，即测定的是T还是A，然后是测量范围，样品的测定范围，然后是扫描波长，设定样品需要扫描的波长范围是从哪儿到哪儿。其次有扫描间隔，扫描间隔指的是仪器每隔多少纳米对样品进行测量，比如1nm为扫描间隔，则仪器从设定的起始波长开始，每隔1nm对样品进行取值，然后将各点连起来就是所需的图象。扫描速度有快中慢三种，这个可以根据所需设定，当然越慢越好。剩下的有扫描次数，指的是对样品进行1次或多次扫描。扫描后图象有重叠或覆盖两种方式，当扫描次数为2次以上时，覆盖则只显示最后一次扫描的图象，重叠则每次扫描的图象都在图象上显示。设定好后，将参比放在光路上进行基线校正，就是在所测的波长范围内每个波长上进行调满度，然后拉到样品上开始测量就好了。
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3楼2013-12-16 19:33:52
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jinwei331

至尊木虫 (文坛精英)
★
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………………………………
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2楼2013-12-16 18:41:28
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吴迪2011

银虫 (小有名气)
扫描波长我也试过，每次若样品浓度不同，扫描峰值也不同吧！我看到也有用220的，谢谢！

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4楼2013-12-17 01:13:56
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
blessing
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6楼2013-12-17 08:25:39
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liufengru

木虫 (正式写手)
★
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大部分用214，少部分用220，差别微小，不同肽可能有差别；280主要是用来检测蛋白的，也有时候检测大分子肽；你的机器如果可以同时设定三个波长，走一遍的话就一目了然了；也可以根据你要的活性峰来选择最佳波长。
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7楼2013-12-17 09:21:23
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吴迪2011

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liufengru at 2013-12-17 09:21:23
大部分用214，少部分用220，差别微小，不同肽可能有差别；280主要是用来检测蛋白的，也有时候检测大分子肽；你的机器如果可以同时设定三个波长，走一遍的话就一目了然了；也可以根据你要的活性峰来选择最佳波长。

214 220 280都试过发现208画出来的图形最好看，但是又怕是多肽用280让人觉得不可信，纠结
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8楼2013-12-17 09:40:16
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xiaoyukong

铁杆木虫 (小有名气)
★
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首先做全光谱扫描，确认最大吸收波长，然后根据实际情况再确定，具体是214还是280，最要是根据多肽蛋白质的氨基酸组成，吸光的波长不样，总体来说差别不是很大
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9楼2013-12-17 10:46:18
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Greatben

银虫 (小有名气)
★
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我们一般都用215

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10楼2014-01-03 13:37:05
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jhoo

至尊木虫 (知名作家)
★
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215，214，220都是检测肽键的，280是检测含有苯环的多肽，如果hplc用214，280一起检测含有苯环多肽是最好的，这样可以检测到你的目的肽。
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11楼2014-08-13 10:03:29
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lion猫5楼
2013-12-17 07:33   回复  
215 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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