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吴迪2011

银虫 (小有名气)


[交流] 多肽紫外检测波长的选择问题

想问一下大家,在做多肽的分离纯化过程中紫外检测选择的波长是多少?214nm还是280nm?原因是什么?
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wangkaikaifh

新虫 (初入文坛)


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zybpxy: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2013-12-17 09:40:41
可以做个全波长扫描看以下的,有的用的是220nm 的,不同的多肽所选择的波长是不一样的。

波长扫描的原理就是在一个波长范围内,对样品进行测量,反映的是样品在不同波长下的吸光度值。操作时需设定测量方式,即测定的是T还是A,然后是测量范围,样品的测定范围,然后是扫描波长,设定样品需要扫描的波长范围是从哪儿到哪儿。其次有扫描间隔,扫描间隔指的是仪器每隔多少纳米对样品进行测量,比如1nm为扫描间隔,则仪器从设定的起始波长开始,每隔1nm对样品进行取值,然后将各点连起来就是所需的图象。扫描速度有快中慢三种,这个可以根据所需设定,当然越慢越好。剩下的有扫描次数,指的是对样品进行1次或多次扫描。扫描后图象有重叠或覆盖两种方式,当扫描次数为2次以上时,覆盖则只显示最后一次扫描的图象,重叠则每次扫描的图象都在图象上显示。设定好后,将参比放在光路上进行基线校正,就是在所测的波长范围内每个波长上进行调满度,然后拉到样品上开始测量就好了。
3楼2013-12-16 19:33:52
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普通回帖

jinwei331

至尊木虫 (文坛精英)


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………………………………
2楼2013-12-16 18:41:28
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吴迪2011

银虫 (小有名气)


扫描波长我也试过,每次若样品浓度不同,扫描峰值也不同吧!我看到也有用220的,谢谢!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-12-17 01:13:56
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)


blessing
6楼2013-12-17 08:25:39
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liufengru

木虫 (正式写手)


★
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大部分用214,少部分用220,差别微小,不同肽可能有差别;280主要是用来检测蛋白的,也有时候检测大分子肽;你的机器如果可以同时设定三个波长,走一遍的话就一目了然了;也可以根据你要的活性峰来选择最佳波长。
7楼2013-12-17 09:21:23
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吴迪2011

银虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by liufengru at 2013-12-17 09:21:23
大部分用214,少部分用220,差别微小,不同肽可能有差别;280主要是用来检测蛋白的,也有时候检测大分子肽;你的机器如果可以同时设定三个波长,走一遍的话就一目了然了;也可以根据你要的活性峰来选择最佳波长。

214 220 280都试过发现208画出来的图形最好看,但是又怕是多肽用280让人觉得不可信,纠结
8楼2013-12-17 09:40:16
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xiaoyukong

铁杆木虫 (正式写手)


★
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首先做全光谱扫描,确认最大吸收波长,然后根据实际情况再确定,具体是214还是280,最要是根据多肽蛋白质的氨基酸组成,吸光的波长不样,总体来说差别不是很大
9楼2013-12-17 10:46:18
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Greatben

银虫 (小有名气)


★
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我们一般都用215

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10楼2014-01-03 13:37:05
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jhoo

至尊木虫 (知名作家)


★
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215,214,220都是检测肽键的,280是检测含有苯环的多肽,如果hplc用214,280一起检测含有苯环多肽是最好的,这样可以检测到你的目的肽。
11楼2014-08-13 10:03:29
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lion猫5楼
2013-12-17 07:33   回复  
215 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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