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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 线性化质粒转染有时候表达有时候不表达，不稳定是什么原因？
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

[求助] 线性化质粒转染有时候表达有时候不表达，不稳定是什么原因？

如题，同一批大抽的质粒，第一次线性化之后瞬时转染细胞，表达很好，便用于电转了
第二次用这个质粒又线性化了，再拿去瞬转表达就很低，注:有阳性对照，阳性对照表达是正常的，所以可以排除细胞和操作方面的原因。
其它线性化的质粒也没有问题，就这个质粒老出问题。
这个转染是重链和轻链两个质粒一起转的。
不知道有没有高人遇到过这情况。
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1楼 2013-12-09 10:15:12
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海绵宝宝心

新虫 (初入文坛)
你好 我们也是电转 问一下线性化质粒就是将质粒单酶切然后割胶回收就可以转染了吗？我们用的质粒含有抗药基因 单酶切后转染是否需要加药

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ivyvampire
2楼2017-05-31 22:31:37
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ivyvampire

新虫 (正式写手)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 海绵宝宝心 at 2017-05-31 22:31:37
你好 我们也是电转 问一下线性化质粒就是将质粒单酶切然后割胶回收就可以转染了吗？我们用的质粒含有抗药基因 单酶切后转染是否需要加药

质粒用酒精离心消毒，在安全柜里吸水后晾干，重悬就可以用了，如果要筛东西，肯定是要加药的

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3楼2017-06-01 22:08:06
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查无此人lyp

新虫 (正式写手)
我也遇到了这个问题，难道真的是偶然事件吗？我也期待着楼主的问题早日解决
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4楼2018-01-04 16:41:32
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