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ivyvampire

新虫 (正式写手)

[求助] 线性化质粒转染有时候表达有时候不表达,不稳定是什么原因?

如题,同一批大抽的质粒,第一次线性化之后瞬时转染细胞,表达很好,便用于电转了
第二次用这个质粒又线性化了,再拿去瞬转表达就很低,注:有阳性对照,阳性对照表达是正常的,所以可以排除细胞和操作方面的原因。
其它线性化的质粒也没有问题,就这个质粒老出问题。
这个转染是重链和轻链两个质粒一起转的。
不知道有没有高人遇到过这情况。
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海绵宝宝心

新虫 (初入文坛)

你好 我们也是电转 问一下线性化质粒就是将质粒单酶切然后割胶回收就可以转染了吗?我们用的质粒含有抗药基因 单酶切后转染是否需要加药

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2楼2017-05-31 22:31:37
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 海绵宝宝心 at 2017-05-31 22:31:37
你好 我们也是电转 问一下线性化质粒就是将质粒单酶切然后割胶回收就可以转染了吗?我们用的质粒含有抗药基因 单酶切后转染是否需要加药

质粒用酒精离心消毒,在安全柜里吸水后晾干,重悬就可以用了,如果要筛东西,肯定是要加药的

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3楼2017-06-01 22:08:06
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查无此人lyp

新虫 (正式写手)

我也遇到了这个问题,难道真的是偶然事件吗?我也期待着楼主的问题早日解决
4楼2018-01-04 16:41:32
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