应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pma0911重组载体转枯草芽孢杆菌wb600
61/1返回列表
查看: 2823  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

宋晨萌1992

铜虫 (初入文坛)

[求助] pma0911重组载体转枯草芽孢杆菌wb600 已有1人参与

转化枯草wb600 一个多月了 用的方法是师兄之前用过的成功了，宿主菌是师兄给的相同的，载体也一样都是pma0911 目的基因比师兄的大800bp转化了好久都不成，师兄也不明原因 方法如下，求大神指导

枯草杆菌化学感受态制备及转化方法
L．试剂
SPI－I Salts Solution：（500g Solution）
0.4％      (NH4)2SO4                                                                   0.2g
2.8%      K2HPO4•3H2O                                                  1.4g
1.2%      KH2PO4                                                                       0.6g
0.2%      Trisodium Citrate Dihydrate                0.1g
121℃灭菌20min

SPI－II Salts Solution：（500g Solution）
0.04%    MgSO4•7H2O                          0.02g
121℃灭菌20min

100× CAYE Solution：（100g Solution）
2％         Casamino acid                           2g
10％       Yeast Extract                             10g
121℃灭菌20min


SPI Medium：（20mL）
9.8mL    SPI－I Salts Solution
9.8mL    SPI－II Salts Solution
200μL （1％V）Glucose（50％W，115℃灭菌20min）
200μL （1％V）100× CAYE

SPII Medium：（6mL）
5.88mL SPI Medium
60μL （1％V）50mM CaCl2
60μL （1％V）250mM MgCl2

100×EGTA Solution：10mmol／L EGTA 溶液，溶解时需加少量NaOH至pH8.0


2 工具：（以下物品均需灭菌）
50mL离心管，1.5mL离心管，5mL枪头，1mL枪头 ，200μL枪头，20μL枪头，空的10mL试管，纱布，涂布棒

3 方法
1、 前一天晚上挑取宿主菌接种于3mL 液体培养基中，37℃摇床培养过夜。
2、 第二天早上从过夜培养物中取100μL菌液，接种至用50mL 离心管配好的5mL SPI Medium中，37℃摇床培养，3hr后开始测OD 600，当培养物生长到对数末期时约4.5小时，快速取200μL接种到2mL SPII Medium中，于37℃100rpm摇床培养1.5hr。
3、 加20μL 100×EGTA溶液，于37℃100rpm摇床培养10min，用1.5mL离心管分装成500μL每管。
4、 向管中加入适量的质粒，轻轻混匀于37℃100rpm摇床培养30min。
5、 将离心管转移到250rpm摇床，37℃培养1.5hr。
6、 以4000rpm离心收集菌体，弃部分上清液，留100μL重悬菌体，涂相应的选择性平板，37℃过夜培养。

试剂原因也考虑过了，重新配了试剂，应该没有问题了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-08 11:02:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xissy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道，你注意没有，SPI和SPII对应的质量都小了一个小数点。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-03-17 21:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宋晨萌1992

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xissy at 2014-03-17 21:21:34
不知道，你注意没有，SPI和SPII对应的质量都小了一个小数点。

谢谢 就是这个原因
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-27 18:08:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我又当如何

新虫 (小有名气)
你好，我小硕一枚，请问您有pma0911质粒的碱基图谱吗？
赞一下 回复此楼
4楼2018-05-17 21:49:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

农大沐心

新虫 (初入文坛)
楼主，请问50%W的葡萄糖怎么配？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2018-06-24 13:43:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小舍的密码

禁虫 (初入文坛)
★
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-10 05:47:45
本帖内容被屏蔽
6楼2018-07-10 00:43:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 宋晨萌1992 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 招08考数学 +4 laoshidan 2026-03-20 8/400 2026-03-22 19:56 by 小皮蛋酱
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +3 niko- 2026-03-22 3/150 2026-03-22 15:15 by 杨杨杨紫
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +14 chaojifeixia 2026-03-19 15/750 2026-03-21 13:24 by zhukairuo
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭