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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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李小冬

金虫 (小有名气)

[求助] 逆向构建空载体

我购买了一个构建好的真核表达质粒,想把这个质粒做成没有目的片段的质粒,用于阴性对照。请各位赐教!
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哎呀呀
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gyesang

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个是非常容易的,设计一对引物,把载体序列PCR出来,引物上带一个相同酶切位点,酶切连接转化
即可

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-03 12:59:22
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李小冬

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-03 12:59:22
这个是非常容易的,设计一对引物,把载体序列PCR出来,引物上带一个相同酶切位点,酶切连接转化
即可

载体6000多个碱基,是否会发生错配啊,需要什么样的酶呢 ?
哎呀呀
3楼2013-12-03 15:03:43
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gyesang

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 李小冬 at 2013-12-03 15:03:43
载体6000多个碱基,是否会发生错配啊,需要什么样的酶呢 ?...

高保真酶,比如KOD和pfu就可以满足要求
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4楼2013-12-03 20:21:40
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李小冬

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-03 20:21:40
高保真酶,比如KOD和pfu就可以满足要求...

再弱弱的问问,我设计引物的时候,5‘端应该是我想要的限制性内切酶的序列,这个是不不可以加保护碱基?
哎呀呀
5楼2013-12-04 13:01:59
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
李小冬: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-12-04 21:33:13
引用回帖:
5楼: Originally posted by 李小冬 at 2013-12-04 13:01:59
再弱弱的问问,我设计引物的时候,5‘端应该是我想要的限制性内切酶的序列,这个是不不可以加保护碱基?...

要加保护碱基,最好要酶切后,回收做连接,转化
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-12-04 14:09:21
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