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关于DEAE-52纤维素洗脱剂的问题 已有1人参与
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| 大家好，我在看关于多糖的DEAE-52的纯化过程中，洗脱剂的问题不是很明白，我看有的用磷酸盐缓冲液的，有的用NaCl Tris-HCl缓冲液的，有的用醋酸盐的、有的用碳酸钠的、有的用氢氧化钠的、我看大多数用的最多的是不同梯度的NaCl进行洗脱，搞不懂我自己要用哪种了,是根据自己实验室的资源来选择呢还是先做下预实验摸索一下哪种好呢？要做预实验的话好麻烦呀。还有大家洗脱剂的用量是怎么确定的？我看文献上有的说用量为柱体积的2-4倍，还是每管都用萘酚-硫酸检测检测，要是没有紫色的环就说明洗脱干净了再换下一种洗脱剂？要不用苯酚-硫酸检测测其OD值，很小的话就换下一种洗脱剂？突然还有一个问题：收集峰位后，浓缩后就真空冷冻干燥吗？那里面的NaCl怎么除去呀？否则它会结晶的呀，麻烦做过的有经验的师兄师姐还有老师们给解答一下，非常感谢！ |
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送红花一朵 3楼2013-12-04 17:56:36
神雕哥
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 首先洗脱剂，我觉得用NaCl就行，DEAE-52主要是分离中性多糖和酸性多糖，一般洗脱液只要能把结合在DEAE-52上的酸性多糖换洗下来就行。我当时用0.1，0.3,0.5,0.7,0.9M的Nacl进行的阶段性洗脱，流速1mL/min，5mL一管，采用苯酚-硫酸法在490nm下测定A，绘制洗脱曲线。至于具体洗几个柱体积，这的根据你样品性质进行预实验。我当时都是洗的4个柱体积。然后根据结果再确定每个梯度具体洗几个柱体积。收集峰位后， 浓缩，透析除盐，然后再冷冻干燥，这样里面得盐就没了，冻干后的样品会很膨松。祝你实验成功 |
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2楼2013-12-04 09:19:00
4楼2018-09-20 10:12:16
