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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌种含量如何确定求助
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晨000000晨

金虫 (小有名气)

[求助] 菌种含量如何确定求助

各位大神，取菌种3一14代营养琼脂斜面新鲜培养物(18h-24h)，用 0.03mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)洗下，稀释成含菌量为 1X10^7cfu/mL--1X10^8cfu/mI的菌悬液。
这个怎么办到呢？我从培养基中取多少菌种混合物加到多少PBS溶液中，能够满足含菌量为 1X10^7cfu/mL--1X10^8cfu/mI呢？新手完全不知道怎么办，希望指点迷经
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1楼 2013-12-02 19:40:38
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pfeng00

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
晨000000晨: 金币+5, 谢谢 2013-12-03 20:19:19
用缓冲液洗下后，取一部分做平板计数，余下的放4℃冰箱，细菌一般24小时就可以在平板上长出来了，再根据计数结果做稀释。绝大部分的细菌，制成菌悬液放4℃冰箱24小时一般不会失活的，我做过一种酵母菌的菌悬液4℃保藏，1个礼拜后才有较大数量的失活。
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2楼2013-12-02 20:10:37
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倾听花开

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
晨000000晨: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2013-12-03 20:20:06
你可以去计数啊，平板计数可以，用血球计数板也可以啊，自己慢慢求就行了

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3楼2013-12-03 07:30:17
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晨000000晨

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pfeng00 at 2013-12-02 20:10:37
用缓冲液洗下后，取一部分做平板计数，余下的放4℃冰箱，细菌一般24小时就可以在平板上长出来了，再根据计数结果做稀释。绝大部分的细菌，制成菌悬液放4℃冰箱24小时一般不会失活的，我做过一种酵母菌的菌悬液4℃保 ...

您好，我那个是固体斜面培养基，用PBS冲洗下，可以取一部分做平板计数，但是下次我怎么定量呢？每次都这样感觉有点麻烦
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4楼2013-12-03 09:22:15
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jianjhui

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
晨000000晨: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2013-12-03 20:20:58
你为什么一定要接到斜面呢。你也可以接种肉汤啊。200R/min振荡培养24h后得菌液，或把平板上的菌落挑到生理盐水中制成菌悬液，10倍稀释法稀释菌液，通过光电比浊法和涂布平板法，可以计算得到原始菌液的浓度，以及校准曲线。以后你要用你就直接用分光光度计或酶标仪测试0D值，就可以通过校准曲线获得菌液浓度，你需要多少的浓度，用菌液来稀释或重悬就可以了。
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5楼2013-12-03 11:36:13
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liurechen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
晨000000晨: 金币+8, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2013-12-03 20:22:12
首先需要稀释的斜面种子肯定不止一支吧，先取其中一支，用定量的PBS洗下，然后用PBS做梯度稀释，选取连续的几个梯度做菌落计数，找到合适的稀释梯度；
然后，再取一支斜面种子，稀释到上次确定的浓度，就可以获得你所需要浓度的菌悬液了（当然，为保险起见可以除目标梯度外再取上下两个浓度）。
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相争两蜗角，所得一牛毛。 且灭嗔中火，休磨笑里刀。
6楼2013-12-03 13:31:36
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bikexmx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
晨000000晨: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2013-12-03 20:22:41
用PBS冲洗下来以后，梯度稀释，用平板计数法确定浓度，长30-300个菌落的板子可以用来计数。
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前方总有更多挑战，战胜恐惧，勇往向前，加油~~~~
7楼2013-12-03 13:55:42
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一枭一剑

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
晨000000晨: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2013-12-03 20:23:00
梯度稀释，平板计数

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8楼2013-12-03 14:21:50
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晨000000晨

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jianjhui at 2013-12-03 11:36:13
你为什么一定要接到斜面呢。你也可以接种肉汤啊。200R/min振荡培养24h后得菌液，或把平板上的菌落挑到生理盐水中制成菌悬液，10倍稀释法稀释菌液，通过光电比浊法和涂布平板法，可以计算得到原始菌液的浓度，以及校 ...

国标上用的斜面，没办法，只能照着做
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9楼2013-12-03 20:18:43
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晨000000晨

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liurechen at 2013-12-03 13:31:36
首先需要稀释的斜面种子肯定不止一支吧，先取其中一支，用定量的PBS洗下，然后用PBS做梯度稀释，选取连续的几个梯度做菌落计数，找到合适的稀释梯度；
然后，再取一支斜面种子，稀释到上次确定的浓度，就可以获得你 ...

已找到方法，和你这个差不多，谢谢
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10楼2013-12-03 20:21:49
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