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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何用紫外分光光度计来确定细菌的浓度？怎么做标准曲线？
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hujing113

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何用紫外分光光度计来确定细菌的浓度？怎么做标准曲线？

各位大侠，我的专业不是生物学，但现在因为课题的需要，想知道怎么做细菌的标准曲线图来确定细菌的含量。
我合成了一种抗菌物质，并把这种物质处理到布上，把处理后的布样放在有细菌的培养液中，经过一段时间的培养，
想知道这时的培养液中的细菌含量与未加布样的对照组的细菌含量（菌落数）。 我知道可以用平板法来做，可是这个工作量太大，
而且我的专业知识不行。能不能用标准曲线的方法来做？要怎么操作呢？我用的菌种是金黄葡萄球菌和大肠杆菌。
最好能给普及一下基础知识。
各位大侠，跪求帮助啊，不胜感激！！！谢谢！
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努力，加油！
1楼 2013-11-14 15:57:26
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hujing113: 金币+10, ★有帮助 2013-11-14 20:55:31
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-11-14 21:35:59
微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。通常400～700nm 都是微生物测定的范围，需要紫外分光光度计测最大吸收波长。你是什么菌种？用得最多的就是505nm测菌丝菌体、560nm测酵母、600nm测细菌。 用测OD方法画微生物生长曲线时，同一株菌的起始培养浓度可以准备多管（根据检测点的需要，如需检测10个点，就准备10管），然后每个点取一管出来测OD值就行了。
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1921952610
2楼2013-11-14 17:12:07
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eagles123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hujing113: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-15 11:49:25
平板好像没啥需要特别注意的。 涂匀就好了。 有什么问题站内短信问我就行
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8楼2013-11-15 11:04:18
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hujing113

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by eagles123 at 2013-11-14 20:53:43
OD只能用来做生长 你要做抑菌 是不能用OD的。 细菌死了 但是细胞还在那。 只能用平板来做。

谢谢您的帮助！
相同的细菌浓度，一个放入抑菌物质，另一个做对照。然后培养24-48h。那么有抑菌物质的那组，细菌的繁殖就会受到限制，对照组是正常生长。用分光光度计测时，两组的吸光度应该是不一样的。这个能在一定程度上反应出抑菌物质的效果吗？
再次感谢！期待您的回复！
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努力，加油！
5楼2013-11-14 21:01:19
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eagles123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

那就要看抑菌剂的效果了。OD的灵敏度很低。如果我记得不错 10*6 CFU/ml 浓度OD都测不出来。 所以如果你抑菌剂比较强你得到的结果就可能是一条平线，但实际上可能是在死或者长得很慢，长到很低的水平就不长了，这些都OD都反映不出来。  另外OD也不能反映这种情况下细菌的生长过程， 比如数量先减少 再增加， 或者先增加到后期再减少。
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6楼2013-11-14 21:14:07
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eagles123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hujing113: 金币+5, ★有帮助 2013-11-14 21:02:29
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-11-14 21:36:09
OD只能用来做生长 你要做抑菌 是不能用OD的。 细菌死了 但是细胞还在那。 只能用平板来做。
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3楼2013-11-14 20:53:43
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hujing113

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by eagles123 at 2013-11-14 21:14:07
那就要看抑菌剂的效果了。OD的灵敏度很低。如果我记得不错 10*6 CFU/ml 浓度OD都测不出来。 所以如果你抑菌剂比较强你得到的结果就可能是一条平线，但实际上可能是在死或者长得很慢，长到很低的水平就不长了，这些都 ...

谢谢！
我之前拿到专业的检测机构测过，处理后的布样的抗菌性是很好的。那这样来看的话，只能用平板法了。这个工作量太大了，而且我一点相关知识都没有，怕自己做不好。而且自己要测的样品数也多。老板说，专业的检测机构太贵，就给实验室添加了一些设备，让我自己测。只能为自己祈祷了。。。关于平板法，您能给几点需要特别注意的事项吗？
再次感谢您的帮助！麻烦您了！
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努力，加油！
7楼2013-11-15 09:31:18
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神
引用回帖:
11楼: Originally posted by 人痴我狂 at 2014-08-04 09:29:49
你好！我现在在做紫外测量生长曲线的实验。所以想向你请教一下。
测量细菌OD值，是离心后沉淀重悬，还是直接吹打混匀后测量？
另外，空白对照是只需要一个，还是每一个都离心后用上清对空白对照？
谢谢！...

一般是混匀就可以测量了，不同的样品需要不同的空白对照，这个根据自己试验情况而定
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12楼2014-08-04 10:55:35
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普通回帖

hujing113

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dllchina at 2013-11-14 17:12:07
微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。通常400～700nm 都是微生物测定的范围，需要紫外分光光度计测最大吸收波长。你是什么菌种？用得最多 ...

谢谢您的帮助！我用的是金黄葡萄球菌和大肠杆菌，应该是600nm。 您能不能具体地给说一下那个曲线的做法 过程 还有起始培养浓度大概取多少合适啊？如果能有相应的步骤那就更好了！ 因为实在是外行，就是这些小问题，也搞不清楚。谢谢您！期待您的回复！
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努力，加油！
4楼2013-11-14 20:54:56
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hujing113

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by eagles123 at 2013-11-15 11:04:18
平板好像没啥需要特别注意的。 涂匀就好了。 有什么问题站内短信问我就行

真是太感谢您啦！！！谢谢！！！
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努力，加油！
9楼2013-11-15 11:49:14
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1921952610

铁虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by dllchina at 2013-11-14 17:12:07
微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。通常400～700nm 都是微生物测定的范围，需要紫外分光光度计测最大吸收波长。你是什么菌种？用得最多 ...

能否具体说一下菌丝菌体的吸光度的测量。或者文献名称也行。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2013-11-18 22:30:43
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