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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 过完阴离子交换柱后需要再过分子筛的蛋白处理方法
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linglingerl

金虫 (初入文坛)

[求助] 过完阴离子交换柱后需要再过分子筛的蛋白处理方法

我提取的粗蛋白刚过完DEAE-纤维素阴离子交换柱得到两个峰，想要确定完这两个峰的酶活性之后再过分子筛，但是收集的这两个峰溶液体积很大，如果冻干的话会有盐析出来，如果是透析的话就是体积太大了，请问各位大虾有什么办法浓缩这个溶液再去上凝胶柱吗？
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1楼 2013-11-22 10:05:11
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同东中郎将

新虫 (小有名气)
可以超滤浓缩一下样品，你蛋白分子量多大的？选择合适的超滤膜可以浓缩蛋白。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
2楼2013-11-22 10:57:42
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linglingerl

金虫 (初入文坛)
★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-11-24 08:56:19
引用回帖:
2楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-11-22 10:57:42
可以超滤浓缩一下样品，你蛋白分子量多大的？选择合适的超滤膜可以浓缩蛋白。

我只是分离某一活性的蛋白，所以分子量、等电点之类的东西都不清楚
如果是超滤，超滤离心可以吗？对于这种离心管有什么要求吗？
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3楼2013-11-22 12:01:01
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kingtsar

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2013-11-22 13:47:51
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linglingerl

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kingtsar at 2013-11-22 13:47:51
分离活性蛋白？什么活性？ 抗氧化还是什么？ 能具体说说么？

DNase
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5楼2013-11-22 14:38:50
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
灌在透析袋里面，外面用PEG，把水洗出来
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6楼2013-11-23 13:53:35
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kingtsar

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2013-11-23 21:28:55
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同东中郎将

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by linglingerl at 2013-11-22 12:01:01
我只是分离某一活性的蛋白，所以分子量、等电点之类的东西都不清楚
如果是超滤，超滤离心可以吗？对于这种离心管有什么要求吗？...

DNase百度，分子量在31KD左右，不知道你的是多少？？
如果是31KD，你可以选择截留量为5KD的超滤离心管，进行浓缩。
浓缩至蛋白浓度10-20mg/ml，过分子筛看一看。
祝你好运。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
8楼2013-11-24 12:58:30
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流浪天涯2013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

超滤离心是可以的，我也在用，看你的蛋白大小，选取合适截流量的离心管就行
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9楼2013-12-02 09:46:32
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shabier

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by linglingerl at 2013-11-22 12:01:01
我只是分离某一活性的蛋白，所以分子量、等电点之类的东西都不清楚
如果是超滤，超滤离心可以吗？对于这种离心管有什么要求吗？...

不知道等电点怎么过的离子层析，还是阴离子层析

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10楼2013-12-02 12:48:54
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