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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 稳转后，用嘌呤霉素筛选
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louisa俊

银虫 (小有名气)

[求助] 稳转后，用嘌呤霉素筛选 已有1人参与

本人最近在稳转，自己构建的慢病毒，通过慢病毒将带有GFP的质粒转到细胞中，荧光显微镜观察，感染效率高、但是一旦用嘌呤霉素筛选24h,转目的质粒的细胞全部死亡，但是对照正常。。稍微降低puro浓度，情况一样。。。求解。。。
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1楼 2013-11-19 14:09:31
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
什么细胞？

多大浓度puro筛选的？

病毒感染后多长时间，开始加puro筛选的？

提供以上信息哈
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-19 14:11:11
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louisa俊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-19 14:11:11
什么细胞？

多大浓度puro筛选的？

病毒感染后多长时间，开始加puro筛选的？

提供以上信息哈

hepa1-6细胞和SMMC-7721,前者Puro浓度时1.0ug/ml 后者是1.5ug/ml. 病毒感染了3天
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3楼2013-11-19 14:15:58
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by louisa俊 at 2013-11-19 14:15:58
hepa1-6细胞和SMMC-7721,前者Puro浓度时1.0ug/ml 后者是1.5ug/ml. 病毒感染了3天...

病毒感染了3天后加puro筛选的？很有可能是你病毒包装的不好，滴度很低，没有感染上细胞
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-11-19 15:05:44
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louisa俊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-19 15:05:44
病毒感染了3天后加puro筛选的？很有可能是你病毒包装的不好，滴度很低，没有感染上细胞...

可是显微镜看荧光，荧光很强。应该说对照的荧光很强，puro筛选，没死。但目的质粒的荧光也还好，显微镜自动曝光时间差不多是150ms左右，puro筛选，死亡
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5楼2013-11-19 19:49:58
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jollycn

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是你的目的质粒会造成细胞凋亡啊，如果那样的话，就先别加puro，让细胞多长几天看看状况，
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6楼2016-01-13 10:53:00
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