24小时热门版块排行榜    

查看: 8351  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

louisa俊

银虫 (小有名气)

[求助] 稳转后,用嘌呤霉素筛选已有1人参与

本人最近在稳转,自己构建的慢病毒,通过慢病毒将带有GFP的质粒转到细胞中,荧光显微镜观察,感染效率高、但是一旦用嘌呤霉素筛选24h,转目的质粒的细胞全部死亡,但是对照正常。。稍微降低puro浓度,情况一样。。。求解。。。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louisa俊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-19 14:11:11
什么细胞?

多大浓度puro筛选的?

病毒感染后多长时间,开始加puro筛选的?

提供以上信息哈

hepa1-6细胞和SMMC-7721,前者Puro浓度时1.0ug/ml 后者是1.5ug/ml. 病毒感染了3天
3楼2013-11-19 14:15:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louisa俊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-19 15:05:44
病毒感染了3天后加puro筛选的?很有可能是你病毒包装的不好,滴度很低,没有感染上细胞...

可是显微镜看荧光,荧光很强。应该说对照的荧光很强,puro筛选,没死。但目的质粒的荧光也还好,显微镜自动曝光时间差不多是150ms左右,puro筛选,死亡
5楼2013-11-19 19:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 louisa俊 的主题更新
信息提示
请填处理意见