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lgluo

新虫 (初入文坛)

[求助] 一个基因 要做定点突变 方法通过同源重组宿主基因组上基因置换

对基因组上一基因进行定点突变,用同源重组替换原有的基因,要怎么设计?单交换和双交换也不是很清楚
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merrybee

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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lgluo: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-18 20:56:29
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 19:43:21
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2楼2013-11-17 10:45:58
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merrybee

禁虫 (正式写手)

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3楼2013-12-12 18:00:23
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lgluo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by merrybee at 2013-12-12 18:00:23
你先说你做的什么生物,目前用什么方法进行基因敲除吧,这样我才能具体跟你说说

做放线菌的
4楼2013-12-13 21:07:51
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merrybee

禁虫 (正式写手)

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5楼2013-12-14 23:17:06
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lgluo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by merrybee at 2013-12-14 23:17:06
没我做过放线菌,先请问你一下放线菌目前有没有成熟的敲除体系(最后不带抗生素标记-Markerless deletion;或者是无痕敲除-scarless deletion)?我觉得应该是存在的,有的话你给我看看,就知道怎么做了...

有通过同源重组进行基因进行敲除,还有位点特异性重组如Cre/loxp、Flp/FRT等,这些要具有重组酶识别的位点,位点特异性重组最后不带抗生素标记
6楼2013-12-16 18:50:23
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