| 查看: 1728 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
细菌菌转化问题，跪求高手赐教
|
||
拿了一株嗜麦芽窄食单胞菌单胞菌转化GFP质粒，做了三月未成功，转化的质粒上有抗氨苄，红霉素及林可霉素基因，这个菌本身就对抗生素抗性极强，三种抗生素混合浓度用到了600ug/ml，该菌才能被完全抑制，做化学转化的时候一般都不会出现克隆，试了几十次了，有一次出现了几个单菌落，但没有荧光，分析可能是超级菌突变株（每次都拿原始菌落做的感受态）。尝试过各种不同的转化条件，od，氯化钙浓度，以及含有氯化镁的培养液培养，但都没有成功。 转化步骤：挑取单菌落过夜培养，取500ul接种到50ml培养液，培养到od为0.5-0.6，冰浴至零度，取10ml，4°离心，7000r 5min，拿出后再加入4ml 预冷20mM氯化钙和30mM氯化镁混合液重悬，相同转速离心，后加入200ul 100mM氯化钙重悬，冰浴1h，加5ul质粒，冰浴30min ，42° 90s，冰浴3min，加入800ul soc培养液摇床培养或温育1h，均匀涂到到抗性平板。 该质粒是组成型表达。原始质粒是puc19，内插入GFP和三种抗生素抗性基因 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有296人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何向培养基中加入抗生素
已经有16人回复
- 关于做染色质免疫共沉淀的几个问题，请高手赐教
已经有7人回复
- 如何通过16SrDNA鉴定菌种
已经有16人回复
- 用塑料的细胞培养瓶培养细菌，细菌是不是容易贴壁生长啊？
已经有5人回复
- 基因敲入，同源重组
已经有10人回复
- 邮件投稿，邮件的正文（中文）如何写？请高手赐教
已经有3人回复
- 测CMC，表面张力在降低，但是不出拐点 求高手赐教啊
已经有9人回复
- 这是什么型号的铝合金？请高手赐教！
已经有22人回复
- C18柱，甲醇洗柱子的时候有柱压，而进流动相时没有柱压，求高手赐教？？
已经有15人回复
- 高手赐教，甲醛的挥发性求助
已经有4人回复
- 高手赐教数学极限考研真题
已经有6人回复
- 稿件大修，审稿人一句话不明白，求高手赐教
已经有4人回复
- 高手赐教 这句话啥意思？
已经有5人回复
- suzuki聚合反应的迷惑，如有高手不吝赐教，当不胜感激
已经有6人回复
- 请问构建系统发育树 比对菌株的选择原则
已经有3人回复
- 运行一个python程序，出现问题，请高手赐教
已经有9人回复
- 什么是原位掺杂？求高手赐教
已经有3人回复
- 重大问题，有谁知道pMD18-t等Amp+抗性载体中AmpR的启动子序列是什么？
已经有3人回复
- 请高手赐教有关氯化次磷酸酯的后处理问题（急）
已经有13人回复
- 【求助/交流】提取大肠杆菌中异源表达的蛋白用什么方法
已经有6人回复
- 【求助/交流】细菌的OD值和CFU之间的关系？
已经有16人回复
- 【求助/交流】求构载体高手 赐教构建亚细胞定位载体pCAMBIA1302
已经有4人回复
- 【求助】请高手赐教有synthetic letter或者synthesis letter 这篇杂志吗？
已经有7人回复
- 【求助】ZSimpWin软件装到我的电脑内怎么不能用呢？
已经有12人回复
3楼2013-11-06 16:44:36
沙门小rna
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 1117.7
- 散金: 5
- 红花: 6
- 沙发: 6
- 帖子: 644
- 在线: 76.7小时
- 虫号: 2012528
- 注册: 2012-09-19
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
。你这个感受态的制备和我们很不一样，我们的od应该是在0.25-0.35之间啊。。。对数期早期。冰上放置30min，然后离菌4k rpm *10min，然后氯化钙洗3次。最后甘油氯化钙重悬。
2楼2013-11-06 13:05:43
4楼2013-11-06 16:51:15
5楼2013-11-06 16:52:58
