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老李笑笑

新虫 (小有名气)

[求助] 半胱氨酸上的巯基氧化 已有2人参与

半胱氨酸与含有羧基的化合物在EDC NHS 存在条件下反应后,测得红外2500左右没有巯基的峰 怎么知道巯基有没有被氧化啊 氧化后可能生成什么呢?求指点啊

[ Last edited by 费姚永芬 on 2013-11-1 at 17:14 ]
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perennials

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
费姚永芬: 金币+1, 周末愉快,谢谢应助,欢迎常来分析版交流 2013-11-03 11:36:14
老李笑笑: 金币+1 2013-11-04 18:17:23
老李笑笑: 金币+2, 有帮助 2013-11-18 15:48:08
巯基氧化后两个巯基生成二硫键,不知道二硫键在IR上还有没有吸收峰。好像看文献,用NaBH4还原后可以用DTNB测巯基含量。还原前和DTNB不反应,还原后反应,那就是你的已经被氧化了,或者直接测还原后的IR。
有个问题请教,cys反应时需要避光吗?不避光会如何呢?也会氧化吗?
2楼2013-11-03 11:30:23
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老李笑笑

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by perennials at 2013-11-03 11:30:23
巯基氧化后两个巯基生成二硫键,不知道二硫键在IR上还有没有吸收峰。好像看文献,用NaBH4还原后可以用DTNB测巯基含量。还原前和DTNB不反应,还原后反应,那就是你的已经被氧化了,或者直接测还原后的IR。
有个问题 ...

我没有避光 现在也不确定有没有氧化
3楼2013-11-04 18:17:47
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老李笑笑

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by perennials at 2013-11-03 11:30:23
巯基氧化后两个巯基生成二硫键,不知道二硫键在IR上还有没有吸收峰。好像看文献,用NaBH4还原后可以用DTNB测巯基含量。还原前和DTNB不反应,还原后反应,那就是你的已经被氧化了,或者直接测还原后的IR。
有个问题 ...

文献上有的说需要避光 我的反应也是在避光下进行的。
4楼2013-11-18 15:48:50
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tjbbtjbbtjbb

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 老李笑笑 at 2013-11-18 15:48:50
文献上有的说需要避光 我的反应也是在避光下进行的。...

你好,我也在做相关的工作,想知道你在避光条件下做出来的效果如何;还有,这个和DTNB反应需要有温度要求么,我有看到文献说是将DTNB搁25℃水浴中;还有,反应使用0.5M pH8.0的PBS缓冲液为溶剂的么?
谢谢
5楼2013-12-04 19:06:51
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老李笑笑

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by tjbbtjbbtjbb at 2013-12-04 19:06:51
你好,我也在做相关的工作,想知道你在避光条件下做出来的效果如何;还有,这个和DTNB反应需要有温度要求么,我有看到文献说是将DTNB搁25℃水浴中;还有,反应使用0.5M pH8.0的PBS缓冲液为溶剂的么?
谢谢...

其实我也不是很明白 用缓冲溶液是因为EDC NHS 活化反应的酸度有一定的要求  至于DTNB我也不是很明白 因为我没有做过 避光反应影响不大
6楼2013-12-07 18:04:36
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tjbbtjbbtjbb

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 老李笑笑 at 2013-12-07 18:04:36
其实我也不是很明白 用缓冲溶液是因为EDC NHS 活化反应的酸度有一定的要求  至于DTNB我也不是很明白 因为我没有做过 避光反应影响不大...

谢谢您  我还有不太清楚的是:巯基对光和空气的敏感程度,在空气中反应时会不会很快发生生成二硫键的副反应呀? 希望您能帮我解答一下疑惑!
7楼2013-12-16 15:37:01
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swallow13

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

8楼2013-12-16 17:01:16
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大眼睛木蜻蜓

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也在做这个,我的半胱氨酸放在冰箱冷藏很久都没事,能与DTNB显色,但32度水浴过夜就检测不出来了是为什么啊,是不是加热加速氧化啊,我现在在通氮气做一个水浴对照的,看看什么情况
9楼2016-01-27 22:11:11
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拔刀斋

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 大眼睛木蜻蜓 at 2016-01-27 22:11:11
我也在做这个,我的半胱氨酸放在冰箱冷藏很久都没事,能与DTNB显色,但32度水浴过夜就检测不出来了是为什么啊,是不是加热加速氧化啊,我现在在通氮气做一个水浴对照的,看看什么情况

后来什么情况?
10楼2016-05-13 15:58:30
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