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小虫友

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 求助如何去除脂蛋白中的triton-X114

最近在用triton-X114提取分离膜蛋白：结果做western蛋白变性时, detergent 层的蛋白煮完后很粘稠，上样感觉有油块状，跑出来的条带也拖尾严重。后面想先用丙酮变性 detergent 层蛋白，将triton114去掉，再用蛋白溶解液复溶蛋白，但老是溶解不完全，蛋白损失严重。请问哪位高手能指导下：如何 去掉detergent 层蛋白中的tritonX114和氯化钠，又能减少蛋白的损失和不可逆变性?
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1楼 2013-10-31 20:22:31
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zwl9426

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-31 23:32:28
triton x-114层主要是膜蛋白，变性时不宜煮，否则会变粘稠。你可以用丙酮沉淀除去detergent，不过，triton x-114层的样品沉淀后不好溶解，因为脂类被抽走，膜蛋白的溶解性变差。一般直接溶解在上样buffer里跑电泳。

楼主您好  我是东南大学的一名研究生  你知道如何溶解PMP22（peripheral myelinprotein 22）膜蛋白吗？
我自己加入了DPC和KPI，最后还是不溶解！真的弄得头大啊！
谢谢了！
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5楼2016-03-19 12:14:02
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cicelyzh

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-01 01:59:14
小虫友: 金币+20, ★有帮助 2013-12-03 14:39:34
triton x-114层主要是膜蛋白，变性时不宜煮，否则会变粘稠。你可以用丙酮沉淀除去detergent，不过，triton x-114层的样品沉淀后不好溶解，因为脂类被抽走，膜蛋白的溶解性变差。一般直接溶解在上样buffer里跑电泳。
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2楼2013-10-31 23:32:28
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小虫友

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
您的意思是说，用丙酮去除detergent后，不加热变性，直接用上样5xbuffer溶剂沉淀，然后跑电泳？我曾经有试过用丙酮沉淀后用含SDS和triton100的buffer 溶解，但效果还是不好。
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3楼2013-11-01 08:27:46
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cicelyzh

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小虫友 at 2013-11-01 08:27:46
您的意思是说，用丙酮去除detergent后，不加热变性，直接用上样5xbuffer溶剂沉淀，然后跑电泳？我曾经有试过用丙酮沉淀后用含SDS和triton100的buffer 溶解，但效果还是不好。

是的。Triton层里都是疏水性强的跨膜蛋白，即使有SDS增溶，溶解性还是比较差的。
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4楼2013-12-03 15:47:56
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