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小虫友

金虫 (小有名气)

[求助] 求助如何去除脂蛋白中的triton-X114

最近在用triton-X114提取分离膜蛋白:结果做western蛋白变性时, detergent 层的蛋白煮完后很粘稠,上样感觉有油块状,跑出来的条带也拖尾严重。后面想先用丙酮变性 detergent 层蛋白,将triton114去掉,再用蛋白溶解液复溶蛋白,但老是溶解不完全,蛋白损失严重。请问哪位高手能指导下:如何 去掉detergent 层蛋白中的tritonX114和氯化钠,又能减少蛋白的损失和不可逆变性?
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-01 01:59:14
小虫友: 金币+20, 有帮助 2013-12-03 14:39:34
triton x-114层主要是膜蛋白,变性时不宜煮,否则会变粘稠。你可以用丙酮沉淀除去detergent,不过,triton x-114层的样品沉淀后不好溶解,因为脂类被抽走,膜蛋白的溶解性变差。一般直接溶解在上样buffer里跑电泳。
2楼2013-10-31 23:32:28
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小虫友

金虫 (小有名气)

您的意思是说,用丙酮去除detergent后,不加热变性,直接用上样5xbuffer溶剂沉淀,然后跑电泳?我曾经有试过用丙酮沉淀后用含SDS和triton100的buffer 溶解,但效果还是不好。
3楼2013-11-01 08:27:46
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小虫友 at 2013-11-01 08:27:46
您的意思是说,用丙酮去除detergent后,不加热变性,直接用上样5xbuffer溶剂沉淀,然后跑电泳?我曾经有试过用丙酮沉淀后用含SDS和triton100的buffer 溶解,但效果还是不好。

是的。Triton层里都是疏水性强的跨膜蛋白,即使有SDS增溶,溶解性还是比较差的。
4楼2013-12-03 15:47:56
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zwl9426

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-31 23:32:28
triton x-114层主要是膜蛋白,变性时不宜煮,否则会变粘稠。你可以用丙酮沉淀除去detergent,不过,triton x-114层的样品沉淀后不好溶解,因为脂类被抽走,膜蛋白的溶解性变差。一般直接溶解在上样buffer里跑电泳。

楼主您好  我是东南大学的一名研究生  你知道如何溶解PMP22(peripheral myelinprotein 22)膜蛋白吗?
我自己加入了DPC和KPI,最后还是不溶解!真的弄得头大啊!
谢谢了!
5楼2016-03-19 12:14:02
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