24小时热门版块排行榜    

查看: 2558  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小虫友

金虫 (小有名气)

[求助] 求助如何去除脂蛋白中的triton-X114

最近在用triton-X114提取分离膜蛋白:结果做western蛋白变性时, detergent 层的蛋白煮完后很粘稠,上样感觉有油块状,跑出来的条带也拖尾严重。后面想先用丙酮变性 detergent 层蛋白,将triton114去掉,再用蛋白溶解液复溶蛋白,但老是溶解不完全,蛋白损失严重。请问哪位高手能指导下:如何 去掉detergent 层蛋白中的tritonX114和氯化钠,又能减少蛋白的损失和不可逆变性?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小虫友

金虫 (小有名气)

您的意思是说,用丙酮去除detergent后,不加热变性,直接用上样5xbuffer溶剂沉淀,然后跑电泳?我曾经有试过用丙酮沉淀后用含SDS和triton100的buffer 溶解,但效果还是不好。
3楼2013-11-01 08:27:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-01 01:59:14
小虫友: 金币+20, 有帮助 2013-12-03 14:39:34
triton x-114层主要是膜蛋白,变性时不宜煮,否则会变粘稠。你可以用丙酮沉淀除去detergent,不过,triton x-114层的样品沉淀后不好溶解,因为脂类被抽走,膜蛋白的溶解性变差。一般直接溶解在上样buffer里跑电泳。
2楼2013-10-31 23:32:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小虫友 at 2013-11-01 08:27:46
您的意思是说,用丙酮去除detergent后,不加热变性,直接用上样5xbuffer溶剂沉淀,然后跑电泳?我曾经有试过用丙酮沉淀后用含SDS和triton100的buffer 溶解,但效果还是不好。

是的。Triton层里都是疏水性强的跨膜蛋白,即使有SDS增溶,溶解性还是比较差的。
4楼2013-12-03 15:47:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zwl9426

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-31 23:32:28
triton x-114层主要是膜蛋白,变性时不宜煮,否则会变粘稠。你可以用丙酮沉淀除去detergent,不过,triton x-114层的样品沉淀后不好溶解,因为脂类被抽走,膜蛋白的溶解性变差。一般直接溶解在上样buffer里跑电泳。

楼主您好  我是东南大学的一名研究生  你知道如何溶解PMP22(peripheral myelinprotein 22)膜蛋白吗?
我自己加入了DPC和KPI,最后还是不溶解!真的弄得头大啊!
谢谢了!
5楼2016-03-19 12:14:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +3 hit_aiot 2026-03-01 5/250 2026-03-02 07:48 by 得鹿梦鱼111
[考研] 0854复试调剂 276 +4 wmm9 2026-03-01 5/250 2026-03-02 06:41 by 汪!?!
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
请填处理意见