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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教去除乳腺组织中的脂肪，浓缩蛋白的方法
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tttanghao

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教去除乳腺组织中的脂肪，浓缩蛋白的方法

目前在做乳腺癌相关的一个western blot
遇到一些情况：1，条带有拖尾现象，不知是否与医生取的样品组织中含有大量的脂肪有关；2，测bradford测的总蛋白，每孔上样量一致，但个别条带跑出来的actin还是比其他 的浅；3，目的条带特别浅

因为样品已经加了loding buffer煮过了，而且特别少，现在也不好再向医生要样品了
所以想提出两个问题，以期解决上述：
1，如何去除像这样的少量的样品中的脂肪；
2，如何浓缩像这样的少量样品的蛋白？

希望能得到大家的解答
并讨论下上述几个情况为何会出现。。。。

[ Last edited by tttanghao on 2010-12-16 at 11:07 ]
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1楼 2010-12-16 10:22:37
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tttanghao

新虫 (小有名气)
沉了
自己顶起一下。。。
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2楼2010-12-16 10:48:06
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tttanghao

新虫 (小有名气)
没人讨论吗？
是我说的不清楚？还是没有好的解决方法呢？
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3楼2010-12-17 08:59:53
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-12-17 11:16:00
tttanghao(金币+1):感谢回复 2010-12-17 17:58:35
最好是脱脂肪后在定量和western blot，用1：1的乙醇与乙醚的混合液沉淀蛋白和祛除脂肪。
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4楼2010-12-17 11:11:46
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tttanghao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2010-12-17 11:11:46:
最好是脱脂肪后在定量和western blot，用1：1的乙醇与乙醚的混合液沉淀蛋白和祛除脂肪。

乙醇和乙醚的混合物如何去除呢？
请问具体的操作方法是？已经加了loding buffer的蛋白还能这么操作吗？
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5楼2010-12-17 18:00:14
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xhjggl

木虫 (正式写手)
tttanghao(金币+1): 2010-12-22 11:07:19
沉淀祛除悬浮的脂肪和乙醇与乙醚的混合液，待乙醇与乙醚的混合液残留液挥发后，用一倍的loading buffer溶解。
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6楼2010-12-18 15:03:51
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